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浙江重组蛋白内毒素检测方法验证
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发布时间：2025年12月15日
样品中的高渗透性成分（如高浓度盐、糖）会通过改变反应体系渗透压，抑制鲎试剂反应，影响内毒素检测结果。例如，浓度为 70% 的葡萄糖溶液、高浓度氯化钠溶液等，会形成高渗透压环境，导致鲎试剂中的蛋白质脱水变性，丧失酶活性，进而使内毒素无法被正常检测，出现假阴性。这类高渗透性基质的干扰机制明确 —— 通过破坏蛋白质结构影响酶促反应，且干扰程度与浓度正相关。为消除这类干扰，解决方案是使用内毒素检查用水稀释样品：根据样品渗透性高低，逐步稀释至适宜浓度（通常需稀释至渗透压与生理盐水接近），降低对蛋白质的脱水作用，恢复鲎试剂中酶的活性。稀释过程中需注意，稀释倍数需在方法验证确定的 “无干扰稀释范围” 内，避免因过度稀释导致内毒素浓度低于检测限，确保内毒素检测既能规避高渗透性抑制，又能准确捕捉微量内毒素。
细菌内毒素试验（BET）是用鲎变形细胞裂解物（LAL）测内毒素的体外方法，LAL 测试获国际药典推荐。浙江重组蛋白内毒素检测方法验证
内毒素检测重组级联试剂（rCR）与天然鲎试剂在原料、性能和可持续性上存在本质区别。原料方面，天然鲎试剂依赖鲎血采集，受动物资源限制，而 rCR 通过基因工程表达 C、B 因子及凝固酶原，无动物源性，供应稳定。特异性上，天然鲎试剂因含 G 因子，易与 β-D 葡聚糖反应产生假阳性，而 rCR 剔除 G 因子，只对内毒素特异性响应，从机制上消除干扰。批间一致性方面，天然鲎试剂受鲎个体差异影响，批间 CV 值较高；rCR 成分明确且生产工艺标准化，批间差异明显降低，CV 值≤15%。两者灵敏度相当（0.005EU/mL），但 rCR 无需面临鲎资源政策限制，更符合动物福利趋势和长期质控需求，是天然鲎试剂的理想替代。
浙江重组蛋白内毒素检测方法验证动态显色法鲎试剂监测吸光度变化定量内毒素，抗干扰强，适配复杂基质样品检测。
湖州申科生物细菌内毒素工作标准品（CSE）源自大肠杆菌（E.coli O111:B4），经过提取精制获得脂多糖，并以细菌内毒素国家标准品为基准标定效价，每支效价处于 10 - 100EU ，量值准确且可靠。在工业内毒素检测中，该标准品应用广且关键。首先，能用于鲎试剂灵敏度复核实验，帮助检测人员准确确认鲎试剂对细菌内毒素的敏感程度，保障检测方法的有效性；其次，可开展干扰试验，评估样品中可能存在的干扰物质对检测结果的影响，以便优化检测流程和方法；再者，能充当各种阳性对照，为检测过程提供参照，确保检测结果的准确性与可靠性。这款标准品不仅适用于凝胶法鲎试剂系列实验，在光度法鲎试剂系列实验中同样能发挥重要作用。使用时，只需参照中国药典2025版第四部通则 1143 的相关介绍进行操作即可。凭借效价标定准确和适用性的优势，该标准品为生物制品、化学药品等各类样品的细菌内毒素检测提供了稳定且可靠的标准，助力企业和检测机构严格把控产品质量，满足法规要求。
动态显色法鲎试剂是湖州申科生物针对生产过程监控开发的内毒素检测工具，兼具准确性和便利性。该试剂灵敏度达 0.005-5EU/mL，标准曲线 R²≥0.990，可准确定量内毒素浓度，满足生物制品中间品和成品的放行需求。成套包装设计包含内毒素标准品、检查用水、主试剂复溶液、主反应试剂、96 孔板及封口膜，无需额外采购辅料，开箱即可使用，减少耗材浪费。稳定性上，批次间 CV 值≤15%，优于行业 20% 的平均水平，确保长期检测数据的一致性。配套抗增液可有效应对蛋白质、多糖等基质干扰，加标回收率稳定在 80%-120%。操作上适配主流酶标仪，支持 405nm 动态读数，数据可自动记录追溯，符合 GMP 数据完整性要求。
绘制内毒素标准曲线时，起始浓度需统一为 1000EU/mL，避免稀释误差。
湖州申科生物动态显色法鲎试剂用于定量测定人用和动物用注射药物、生物制品及医疗器械等样本中的细菌内毒素的含量。 细菌内毒素能特异性地活化反应主剂中的 C 因子，活化的 C 因子活化 B 因子，活化的 B 因子进而活化凝固酶原，凝固酶水解反应中的显色底物，产生游离的pNA（对硝基苯胺）从而引起吸光度变化，根据动态检测溶液吸光度变化率对内毒素进行定量。本品能够快速、高灵敏度地定量检测样品中的内毒素水平，适用于各种实验室和工业生产场景，确保产品质量和安全性。
湖州申科凝胶法鲎试剂符合药典要求，配抗增液抑制非特异性反应，多灵敏度可选。江苏非动物源内毒素检测法规要求内毒素检测需关注制剂成分，螯合剂和表面活性剂可能诱发“低内毒素回收（LER）”。浙江重组蛋白内毒素检测方法验证
在为新物料或新产品、中间产品建立细菌内毒素检测方法时，常会遇到各种困难，尤其是尚处于新药研发早期阶段的药物。此时，由于药物制剂、缓冲系统等还不稳定，经常会发生变化，这样就给方法的建立带来了不同程度的影响。在建立细菌内毒素检查法之前，须尽可能多地了解有关该药品的基本信息，例如：有关样品的可溶性信息、推荐的稀释液、在水中的溶解度以及合适溶剂，样品的pH范围，分子量大小；如果是蛋白产品，还要了解该产品的等电点，产品规格、体积或重量，拟用于临床的用法和用量等，以便选择合适的样品处理方法和内毒素检测方法。
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