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上海化学制药内毒素检测常见问题分析
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发布时间：2025年11月20日
内毒素检测中，样品中的蛋白质或酶的修饰作用易破坏鲎试剂的反应体系，导致检测结果失真。鲎试剂检测内毒素的本质是一系列丝氨酸蛋白酶的酶促放大过程，若样品中存在氧化剂、抗氧化剂、蛋白水解剂或专一失活剂，会直接灭活反应所需的酶；而乙醇、苯酚等物质则会导致蛋白质变性，同样抑制反应进程。例如，某些生物制品中含有的蛋白水解酶，可能提前降解鲎试剂中的蛋白酶，使内毒素无法被正常检测。为消除这类干扰，需优先限制样品中抑制物的含量：可采用内毒素检查用水稀释样品，降低抑制物浓度；对耐热的抑制物（如部分蛋白水解酶），可通过加热灭活处理（如 56℃孵育 30 分钟）破坏其活性；若样品基质复杂，还可使用超滤技术分离内毒素与干扰蛋白质，避免修饰作用对酶促反应的影响，保障内毒素检测结果的可靠性。
样本含内毒素结合物时，可尝试用分散剂减少抑制，保障内毒素正常检出。上海化学制药内毒素检测常见问题分析
《中国药典》对内毒素检测提出了非常严格的要求，以确保药品的质量和安全性。湖州申科生物提供一系列高质量的细菌内毒素检测产品，旨在为实验室和工厂生产提供准确、快速的检测方案，产品涵盖了凝胶法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、重组C因子法（rFC）和重组级联试剂（rCR）、无热原吸头、内毒素检查用水、自动化设备、内毒素工作标准品、内毒素指示剂等多种产品，满足不同场景下的需求，同时可为复杂样品基质的内毒素检测提供解决方案。
上海化学制药内毒素检测常见问题分析鲎试剂含多种酶和辅助因子，批次间活性差异可能导致内毒素检测结果变异性。
内毒素检测鲎试剂的反应受pH的干扰。在进行检测时，要调节被测溶液的pH值，使鲎试剂与供试品溶液的混合溶液pH值落在鲎试剂指定的使用pH范围内（一般鲎试剂作用pH值在6.0~8.0范围内)。用于调节pH值的试液或溶液（酸或碱)，可采用BET用水配制，并将溶液在无热原容器中储存；必须对试液或溶液进行验证，以证明不含可检出的内毒素并且无干扰因素。调节pH试剂（酸或碱）的添加量，不应该超过供试品的1092。如果超过10%，则在进行计算时，将DH试剂的添加量的系数计算进去。
动态显色法鲎试剂是湖州申科生物针对生产过程监控开发的内毒素检测工具，兼具准确性和便利性。该试剂灵敏度达 0.005-5EU/mL，标准曲线 R²≥0.990，可准确定量内毒素浓度，满足生物制品中间品和成品的放行需求。成套包装设计包含内毒素标准品、检查用水、主试剂复溶液、主反应试剂、96 孔板及封口膜，无需额外采购辅料，开箱即可使用，减少耗材浪费。稳定性上，批次间 CV 值≤15%，优于行业 20% 的平均水平，确保长期检测数据的一致性。配套抗增液可有效应对蛋白质、多糖等基质干扰，加标回收率稳定在 80%-120%。操作上适配主流酶标仪，支持 405nm 动态读数，数据可自动记录追溯，符合 GMP 数据完整性要求。
塑料器皿对内毒素吸附力强，制备内毒素工作标准品（CSE）稀释液建议用硼硅酸盐玻璃管。
重组级联试剂作为内毒素检测鲎试剂的理想替代方案，其具备的优势有：①优化的G因子级联反应，无G因子旁路干扰。采用基因重组技术表达鲎血细胞中的C因子（Factor C）、B因子（Factor B）和凝固酶原（Proclotting enzyme），无G因子旁路干扰，排除1，3-β-D葡聚糖假阳性风险。②依然采用动态显色法原理，可沿用天然鲎试剂检测设备。重组级联试剂（rCR）,与天然鲎（动态显色法）具有相同的操作流程、检测设备、分析方法，用户可以沿用天然鲎的仪器、软件、耗材、人员培训、验收程序等，无需投入额外成本。③具有与天然鲎的相同反应机制，检测结果具有等效性。完全模拟了天然鲎试剂的酶联反应，由3种蛋白组成的级联反应机制提供了信号放大的过程，确保了检测的准确性和灵敏度。湖州申科按照药典要求进行替代方法验证，无缝衔接技术转移，助力用户从方法验证到工艺落地，从数据合规到全球申报。
细菌内毒素试验（BET）是用鲎变形细胞裂解物（LAL）测内毒素的体外方法，LAL 测试获国际药典推荐。上海化学制药内毒素检测常见问题分析湖州申科凝胶法鲎试剂符合药典要求，配抗增液抑制非特异性反应，多灵敏度可选。上海化学制药内毒素检测常见问题分析
β- 葡聚糖是鲎试剂（LAL）检测内毒素的常见干扰物，可活化 LAL 中的 G 因子通路，导致假阳性结果。干扰多见于含植物源原料的样品（如中药注射剂）、生物发酵产物或环境真菌污染的样品。消除方法包括：使用特异性 LAL 试剂（如添加葡聚糖抑制剂的 LAL），其只对内毒素敏感而不受 β- 葡聚糖影响；采用加热处理（如 80℃加热 10 分钟）破坏 β- 葡聚糖结构；或通过亲和层析去除样品中的 β- 葡聚糖。检测时需设置 β- 葡聚糖阳性对照，若对照反应阳性而内毒素标准品无反应，表明存在干扰，需优化前处理步骤后重新检测。
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