北京细胞基因治疗产品用宿主细胞蛋白(HCP)残留检测试剂盒
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发布时间:2025年10月23日
SHENTEK®AbunProteoX 是以磁珠为基础构建的亲和配体,适用于多种生物制品样本。其操作流程经精心设计,简化高效,方便用户操作。与传统非变性酶解方法相比,AbunProteoX 能有效提升 HCP 的检出效果,有效降低质谱分析的检测下限,使低丰度蛋白得以有效检出,保障了检测的高灵敏度。即便存在高丰度目标蛋白时,经 AbunProteoX 处理后,仍能有效分析宿主细胞蛋白(HCPs),为生物制品中宿主细胞蛋白残留控制提供了简便、易用且高效的样品处理工具。
湖州申科建立宿主特异 HCP 数据库,支持高风险蛋白准确鉴定与分析。北京细胞基因治疗产品用宿主细胞蛋白(HCP)残留检测试剂盒
方法选择是影响宿主细胞蛋白(HCP)残留检测结果的因素之一。酶联免疫吸附法(ELISA)与液相色谱 - 质谱联用技术(LC-MS),是当前 HCP 检测领域的两类常用方法。据文献统计,当前在总 HCP 定量检测中,ELISA 仍为主流技术;而 MS 法可用于特定蛋白(如高风险蛋白)的鉴定与定量,已成为重要的互补手段。此外,检测过程中所用试剂与耗材的质量,会直接影响检测结果的准确性。质量不达标的试剂,可能引发检测结果出现假阳性或假阴性。举例来说,若抗体的特异性与亲和力不足,可能在 ELISA 检测中产生交叉反应;若抗原代表性不足或抗体覆盖率偏低,则可能造成漏检;而稀释液抗干扰能力较弱时,也会对检测准确性产生影响。相关案例研究显示,采用定制化方法替代原有商业化试剂盒后,抗原代表性与抗体覆盖率明显提升,HCP 检测值也呈现整体升高的趋势。
ELISA法宿主细胞蛋白(HCP)残留检测方法对比湖州申科HCP试剂盒开发经抗原表征、抗体制备到体系验证,全流程符合法规要求。
为何定制化试剂盒是宿主细胞蛋白(HCP)残留检测的优先选择?特定工艺来源的抗原与校准品更具代表性,是重要原因之一。不同生物制品的上游生产工艺存在差异,比如培养基、培养条件、收获时机等不同,都会使产生的 HCP 在蛋白种类、丰度及翻译修饰上出现区别,进而导致进入下游纯化工艺的 HCP 类型相应改变 —— 尤其是与药物主成分共同纯化的 HCP,会以优势蛋白的形式存在于药物原液或制剂中。HCP 定制化 ELISA 检测试剂盒通常选用实际生产工艺中上游发酵后的样品制备抗原与校准品,这样制得的校准品能较充分地体现实际工艺中的 HCP,有效降低因抗原或校准品种类不足引发的漏检风险,同时减少定量不准确的问题。
湖州申科生物CHO-K1HCP残留检测试剂盒(一步酶联免疫吸附法),采用固相酶联免疫吸附法原理,可对CHO-K1细胞生产的生物制品中宿主残留蛋白进行定量检测。检测时,向预包被抗CHO-K1HCPs绵羊多抗的酶标板中,加入校准品或待测样品、HRP标记的抗CHO-K1HCPs绵羊多抗共同孵育。洗涤后加入TMB底物显色,随后用终止液终止酶促反应;再用酶标仪在450nm波长下测定吸光度,该吸光度与校准品或待测样品中HCPs浓度呈正相关,依据校准品拟合的剂量-反应曲线,即可算出待测样品中HCPs的浓度。该试剂盒对待测样品无需特殊处理,通过合适稀释比例的适用性验证,即可直接使用。且试剂盒操作步骤少、检测快速,同时具备专一性强、性能稳定可靠的特点。
遵循严格且科学的宿主细胞蛋白残留检测标准,是确保产品顺利达标的重要基础条件。
湖州申科生物凭借自主可控的供应链与经严格验证的技术性能,确保 HCP 检测试剂盒的长期稳定供应及出色分析能力。一方面,公司实现关键物料自研自产:校准品通过冻干工艺大规模生产,能稳定储存 10 年以上;抗体经大动物免疫制备,产量可支撑≥10,000 盒试剂盒生产,确保同批次抗体连续供应超 10 年;试剂盒经多批次验证,批内与批间一致性表现良好。另一方面,所有产品均参照 ICH Q2(R2)及 ICH M10 法规要求完成验证:以大肠杆菌(E.coli)HCP 产品为例,其线性范围(1-243 ng/mL)的 R²>0.999,各浓度点回收率偏差≤5%;准确度处于 81.2%-111.6% 区间,中间精密度 CV 值为 5.7%-12.4%;定量限(LLOQ)低至 1.5 ng/mL,且对 CHO、HEK293 等多种宿主细胞的交叉反应均低于检测限。同时,借助二维电泳(检出 826 个蛋白点)与质谱法(鉴定 2204 个蛋白点)对校准品进行双重表征,并运用 IMBS-2D(覆盖率 > 70%)与 IMBS-MS(覆盖率 84.7%)正交技术验证抗体覆盖率,从源头保障检测结果的全面性与可靠性。
在生物制品质控领域需要基于产品特性与风险分析,聚焦关键质控点开发宿主蛋白残留检测方法。
宿主细胞蛋白(HCP)残留检测高风险蛋白SHENTEK® AutoElisa-4K HCP 检测自动化系统可减少人为误差,满足 21 CFR Part 11 数据管理要求。北京细胞基因治疗产品用宿主细胞蛋白(HCP)残留检测试剂盒
宿主细胞蛋白(HCP)多与细胞关键功能相关,例如细胞增殖、基因转录、蛋白合成修饰、细胞存活及凋亡等,在生产工艺中会因细胞分泌、死亡或裂解而释放。生产过程里,有三大因素主要影响 HCP 的组成与丰度:①宿主细胞基因组调控及培养工艺:特定工艺下,潜在 HCP 数量可能极多,且并非所有基因都会表达,部分基因的表达具有时间和条件特异性;像大肠杆菌约含 4300 个基因,不同工艺产物会经历独特的翻译后修饰,这增加了 HCP 的总数与生化复杂性。研究显示,大肠杆菌表达的蛋白间存在数量差异,这种差异可能是对环境条件的适应性反应,但 85-90% 具有潜在免疫原性的 HCP 在不同发酵过程中均会出现。②产物表达方式:宿主细胞与外源基因、载体及辅助成分构成的体系,可实现稳定、瞬时及诱导表达;以大肠杆菌为例,常见表达形式包括胞内表达、分泌表达、可溶性表达、不溶性包涵体形式,还有融合与非融合表达。③纯化步骤及产品自身特性的影响:纯化过程中能去除 99% 以上的 HCP,但仍有少量残留 HCP 留在产品中,这些残留 HCP 可能与产品结合,随产品一同被纯化。
北京细胞基因治疗产品用宿主细胞蛋白(HCP)残留检测试剂盒