成都E.coli表达菌宿主细胞蛋白(HCP)残留检测
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发布时间:2025年10月23日
磷脂酶 B 样蛋白 2(Phospholipase B-Like 2,PLBL2/PLBD2),凭借强共纯化能力、高免疫原性及潜在酶活性,被认定为 CHO 宿主细胞蛋白(HCP)中的关键高风险因子之一。当前行业建议,需针对性开发特定检测方法,对这类已知或特定蛋白进行监控,以更有效把控其潜在风险。SHENTEK® CHO PLBL-2 残留检测试剂盒(酶联免疫吸附法)由湖州申科生物自主研发,拥有完全自主知识产权,是一款 CHO PLBL-2 蛋白通用检测试剂盒。该试剂盒适用于对 CHO 表达系统生产的生物制品中,CHO HCP 高风险蛋白 PLBL-2 进行定量检测,且操作步骤少、检测快速,兼具强检测专一性与稳定可靠的性能。
湖州申科宿主细胞蛋白(HCP)残留检测试剂盒校准品冻干保存,稳定性超 10 年,保障长期供应。成都E.coli表达菌宿主细胞蛋白(HCP)残留检测
宿主细胞蛋白残留检测中,抗体覆盖率评估实验的操作难度较高,需在实验方法建立阶段对关键步骤开展充分验证,以确保实验方法具备稳健性。湖州申科研发的磁珠捕获式 IMBS 技术(immunomagnetic beads separation,免疫磁珠分离),在开发过程中已对关键步骤进行充分验证,相关验证结果已通过专业评审,具体验证内容(部分)如下:① 方法优化:围绕磁珠与抗体的偶联比例、洗涤液体积、洗涤次数、洗脱次数等关键参数开展优化验证,确保方法稳健性;② 过程质控:二维电泳存在实验步骤繁琐、时间跨度大、中间环节难把控等问题,因此在等电聚焦实验环节引入荧光标记多肽,可快速判定等电聚焦效果;同时在 SDS-PAGE 电泳两侧增设 40 ng 银染质控样品,用于控制银染显色过程;③ 方法重复性:针对 2D 分析与 LC-MS 分析开展重复性验证,其中 2D 分析方法的重复性可达 80% 以上,LC-MS 分析方法的重复性可达 90% 以上;④ 上样量优化:针对 2D 分析与 LC-MS 分析实施上样量验证,规避上样量差异对检测结果的影响;⑤ 假阳性排查:排查样品与阴性抗体间是否存在非特异性结合,确认 IMBS 实验设定的步骤与参数是否会导致假阳性结果。
PG13宿主细胞蛋白(HCP)残留检测方法学验证遵循严格且科学的宿主细胞蛋白残留检测标准,是确保产品顺利达标的重要基础条件。
湖州申科生物CHO-K1HCP残留检测试剂盒(一步酶联免疫吸附法),采用固相酶联免疫吸附法原理,可对CHO-K1细胞生产的生物制品中宿主残留蛋白进行定量检测。检测时,向预包被抗CHO-K1HCPs绵羊多抗的酶标板中,加入校准品或待测样品、HRP标记的抗CHO-K1HCPs绵羊多抗共同孵育。洗涤后加入TMB底物显色,随后用终止液终止酶促反应;再用酶标仪在450nm波长下测定吸光度,该吸光度与校准品或待测样品中HCPs浓度呈正相关,依据校准品拟合的剂量-反应曲线,即可算出待测样品中HCPs的浓度。该试剂盒对待测样品无需特殊处理,通过合适稀释比例的适用性验证,即可直接使用。且试剂盒操作步骤少、检测快速,同时具备专一性强、性能稳定可靠的特点。
昆虫细胞杆状病毒表达系统(IC-BEVS)是一种真核表达系统,以杆状病毒为外源基因载体,以昆虫细胞为宿主实现外源蛋白的生产。该系统具备便于规模化生产、培养成本低、生物安全性高等优势,近年已逐步应用于重组蛋白、rAAV 载体、亚单位疫苗(如病毒样颗粒(VLP)疫苗)等产品的生产,在生物制品重组蛋白表达领域已得到广泛应用。Sf9 细胞系源自草地夜蛾细胞系(Spodoptera frugiperda cell line,简称 Sf),是当前较为常用的昆虫细胞系之一。SHENTEK® Sf9 HCP 残留蛋白检测试剂盒(一步酶联免疫吸附法),可对采用 Sf9 细胞系生产的生物制品中宿主细胞蛋白(HCP)残留进行定量检测。该试剂盒的抗体覆盖率分别为 70.4%-96.0%(采用 IMBS-2D 法)和 91.2%(采用 IMBS-MS 法,Unique Peptide ≥2)。
通用型试剂盒为市售广谱方案,使用前需严格评估抗体对特定 HCP 的覆盖率。
各国法规要求对生物药品开展分析与纯化处理,以将宿主细胞蛋白(HCP)降至可接受水平;即便终产品中痕量 HCP 进入患者体内,目前仍不明确特定残留蛋白质杂质是否会对药物的稳定性或免疫原性产生影响。在 HCP 限量标准方面,美国药典推荐终产品 HCP 水平为 1-100 ng/mg;中国药典各论则明确,大肠杆菌(E.coli)菌体 HCP 需不高于蛋白质总量的 0.10%(即 1000 ng/mg),CHO 细胞 HCP 需不高于蛋白质总量的 0.05%(即 500 ng/mg),假单胞菌 HCP 需不高于蛋白质总量的 0.02%(即 200 ng/mg)。
湖州申科建立宿主特异 HCP 数据库,支持高风险蛋白准确鉴定与分析。广东E.coli克隆菌宿主细胞蛋白(HCP)残留检测
总蛋白检测差异是 HCP 免疫检测结果不同的原因之一。成都E.coli表达菌宿主细胞蛋白(HCP)残留检测
LC-MS/MS 作为成熟稳定的蛋白质组学分析技术,依托超高分辨率与准确度,在生物分析领域中占据关键地位。该技术不仅可对低含量宿主细胞残留蛋白(HCP)开展定性检测,还能通过构建专属蛋白质谱库准确鉴定 HCP 的具体种类,为深度解析残留蛋白组成提供重要支撑。不过该技术应用中面临的主要挑战,是如何优化 LC-MS 方法以契合 GMP 规范对产品放行检测的严苛要求。在质谱检测环节,引入表征明确的内标与外标蛋白,可准确分析 HCPs 的整体组成,并有效识别其中具有潜在风险的高风险蛋白。这一技术手段不仅为开发产品专属 HCP ELISA 检测方法提供有力数据支撑,还可助力工艺优化升级,加快推进生物制品从研发到获批上市的全流程进度。
成都E.coli表达菌宿主细胞蛋白(HCP)残留检测