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单抗药物用宿主细胞蛋白（HCP）残留检测方法学验证
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发布时间：2025年10月14日
宿主细胞残留蛋白（HCP）检测是生物制品质量控制的关键环节，当前主流技术为基于抗体的免疫学方法（如 ELISA）。但实际检测中，不同试剂盒的结果常存在明显偏差，关键问题源于其两大关键组分 ——HCP 校准品与检测抗体 —— 在制备及表征上的高度可变性。作为定量基准的校准品，自身复杂性极高。不同供应商制备时，所用细胞来源、培养及表达条件存在明显差异，且宿主蛋白的提取纯化工艺（如目标产物去除策略）也各不相同，这些差异直接导致校准品的组成、对实际样品的代表性及储存稳定性千差万别。检测抗体（尤其是多克隆抗体）需通过免疫动物获得，其特异性与 HCP 覆盖度受多重因素影响：免疫原的选择、动物个体免疫应答差异、免疫方案设计，以及后续抗体筛选与纯化流程，都会让不同批次或来源的抗体，在对不同 HCP 的亲和力、对低丰度蛋白的检测灵敏度等识别谱特性上，形成本质区别。
抗体覆盖率是 HCP 检测关键指标，影响结果可信度，需通过方法验证。单抗药物用宿主细胞蛋白（HCP）残留检测方法学验证
湖州申科生物CHO-K1HCP残留检测试剂盒（一步酶联免疫吸附法），采用固相酶联免疫吸附法原理，可对CHO-K1细胞生产的生物制品中宿主残留蛋白进行定量检测。检测时，向预包被抗CHO-K1HCPs绵羊多抗的酶标板中，加入校准品或待测样品、HRP标记的抗CHO-K1HCPs绵羊多抗共同孵育。洗涤后加入TMB底物显色，随后用终止液终止酶促反应；再用酶标仪在450nm波长下测定吸光度，该吸光度与校准品或待测样品中HCPs浓度呈正相关，依据校准品拟合的剂量-反应曲线，即可算出待测样品中HCPs的浓度。该试剂盒对待测样品无需特殊处理，通过合适稀释比例的适用性验证，即可直接使用。且试剂盒操作步骤少、检测快速，同时具备专一性强、性能稳定可靠的特点。
MRC-5宿主细胞蛋白（HCP）残留检测方法学验证湖州申科全自动 HCP ELISA 系统实现从加样到检测自动化，提升效率。
大肠杆菌具有遗传背景明确、便于培养与调控、蛋白表达量高、成本低廉且培养周期短等特点，是性价比高的蛋白表达系统。其中，K-12系列与B系列菌株是工业级生物工程中常用的大肠杆菌菌株。K-12菌株及其衍生的DH5α、Top10、JM109等菌株，可用于大规模生产质粒DNA，进而制备细胞基因治疗产品与病毒载体类疫苗；而源自B系列的菌株（如BL21），更适合高效转染表达载体及常规蛋白的表达，例如病毒蛋白、重组蛋白疫苗、细胞因子、酶类等产品。湖州申科生物依据这两种菌株的特性，分别研发了大肠杆菌表达菌HCP残留检测试剂盒与大肠杆菌克隆菌碱裂HCP残留检测试剂盒。
HEK293细胞源自人胚肾细胞，在细胞与基因治疗领域应用较广，例如用于病毒载体生产等。尽管生物制品会经过多步纯化工艺去除相关杂质，但微量残留的宿主细胞蛋白（HCP）仍可能引发机体免疫应答，进而影响产品质量与安全性。因此，需对生产工艺中残留的HEK293 HCP开展定量检测，确保其符合产品放行标准。湖州申科生物的HEK293 HCP残留检测试剂盒（一步酶联免疫吸附法），适用于对HEK293及HEK293T来源生物制品（如重组蛋白类、细胞和基因治疗类等）中的宿主细胞蛋白进行定量检测。该试剂盒检测步骤少、速度快，且具备专一性强、性能稳定可靠的特点。
为确保HCP ELISA检测产品符合申报要求，湖州申科在试剂盒的全流程开发方案严格按照法规要求。
中国仓鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是生物制品生产中常用的动物细胞表达系统，广泛应用于抗体、重组蛋白、疫苗等产品的制备。采用 CHO 细胞作为宿主进行生产时，难免会引入宿主细胞蛋白（HCP）杂质；即便 HCP 残留量较低，仍可能存在免疫原性，还会带来降低产品蛋白稳定性等风险。因此，需对生物制品中的 HCP 残留进行定量分析，从而保障纯化工艺的一致性与终产品的安全性。SHENTEK®CHO 宿主细胞蛋白（HCP ）残留检测试剂盒实现了关键试剂的全国产化，其通过 CHO 细胞（K1&S）补料分批培养工艺制备 HCPs，再以此免疫绵羊获取抗体，适用于检测 CHO 细胞系表达的生物制品（如单抗、重组蛋白、疫苗等）中的 HCP 残留。该试剂盒具有操作步骤少、检测速度快、专一性强、性能稳定可靠的特点。
湖州申科HCP试剂盒定制化开发方案全流程按照ISO13485质量保证体系管理，符合审计要求。酿酒酵母宿主细胞蛋白（HCP）残留检测试剂盒湖州申科可根据客户要求，快速定制符合用户生产工艺的HCP商业化检测试剂盒，满足用户快速替换的检测需求。单抗药物用宿主细胞蛋白（HCP）残留检测方法学验证
宿主细胞蛋白（HCP）的来源中，常伴随核酸、胞膜脂类及培养基中的氨基酸等非HCP成分，这些成分会干扰总蛋白检测的准确性，因此在检测前需开展纯化前处理，同时对总蛋白检测方法实施方法学确认。HCP本身属于多蛋白混合物，不同总蛋白定量方法的检测结果会存在一定差异，这也是造成HCP免疫检测方法结果不一致的原因之一。若不同HCP蛋白定量方法的检测结果差异较大，通常需同时采用2种及以上经确认的方法进行检测，随后取平均值。总蛋白检测方法的定量限通常只能达到μg/mL级别，而HCP检测试剂盒的产品校准品浓度则处于ng/mL级别。将HCP高浓度原液稀释至低浓度产品校准品的过程中会产生稀释误差，因此需对产品校准品重新进行标定赋值。编辑分享用多种方法确认检测结果时，如何选择合适的方法组合？总蛋白检测定量限与HCP校准品浓度差异大的原因是什么？有哪些方法可以降低非HCP成分对检测的干扰？
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