江苏内毒素检测凝胶法鲎试剂
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发布时间:2025年10月08日
生物制品(如单抗、疫苗、重组蛋白)注射剂因直接进入人体,对细菌内毒素残留限值要求严苛(通常≤0.5 EU/mg 或更低),检测面临基质复杂、干扰物质多等挑战。样品中常见的蛋白质、螯合剂、表面活性剂等可能抑制或增强 LAL 反应,需通过预处理消除干扰:如采用稀释法降低基质浓度、添加中和剂(如 Mg²⁺)修复反应体系,或使用热灭活去除蛋白类干扰物。此外,生物制品生产全流程需进行内毒素监控,从细胞培养上清、纯化中间品到终产品均需检测,确保工艺去除内毒素的有效性,符合 ICH Q6B 等法规对 “关键质量属性” 的控制要求。
细菌内毒素检测中,rCR 对高蛋白(如单抗、FBS)、细胞培养上清等特殊样本适配性好。江苏内毒素检测凝胶法鲎试剂
内毒素检测方法验证需覆盖多项参数,确保方法可靠:线性范围需包含样品预期浓度(如 0.01-10 EU/mL),相关系数 R²≥0.98;准确度通过加标回收率评估,应在 50%-200% 范围内;精密度包括批内和批间精密度,CV 值均应≤15%;检测限(LOD)需低于产品限值的 1/2(如限值 0.5 EU/mL,LOD 应≤0.25 EU/mL);专属性需证明无干扰物质影响(如 β- 葡聚糖、蛋白质不引发假阳性)。验证通过后,方法需经实验室负责人批准方可使用,且定期需进行一次回顾性验证,确认方法持续有效。
浙江细菌内毒素检测重组级联试剂(rCR)细菌内毒素检查有凝胶法和光度测定法,结果有争议时,除规定外以凝胶限度试验为准。
内毒素检测常与热原检测混淆,二者既有关联又有区别:热原是指所有能引起发热的物质(包括内毒素、病毒、真菌等),通过传统家兔热原试验检测;内毒素是热原的主要成分(占 90% 以上),检测更具特异性。目前,家兔热原试验因操作复杂、动物成本高,已逐渐被单核细胞活化反应测定法(MAT)替代,但部分产品(如放射性质药物、血液制品)仍需保留家兔试验作为补充。法规要求内毒素检测结果需与热原风险关联,若内毒素检测合格但临床出现热原反应,需排查是否存在非内毒素类热原,通过联合检测确保产品安全性。
随着动物保护理念和法规要求升级,重组因子C法(rFC法)作为 LAL 法的替代技术逐渐普及。重组 C 因子是以基因重组的方式表达的 LAL 试剂中的 C 因子,C 因子被内毒素活化后切割荧光底物产生游离荧光基团,通过检测荧光信号可以反应活化后的蛋白酶活性,并由此可以推算出内毒素的含量。与传统 LAL 法相比,rFC 法无需依赖鲎血资源,避免了天然 LAL 试剂批间差异大、易受 β- 葡聚糖干扰等问题,且反应特异性更强。目前,《美国药典》、《欧洲药典》等法规已收录 rFC 法,欧盟更推荐其用于疫苗等高风险产品检测,在保证检测准确性的同时,符合动物福利和可持续发展要求。
表面活性剂会改变内毒素活性,用重组级联试剂检测前需稀释样本,消除其对反应的干扰。
内毒素检测重组级联试剂(rCR)在方法桥接方面具有明显优势,可大幅度降低实验室的转换成本。在设备兼容性上,rCR 无需额外采购新设备,完全适配天然鲎动态显色法现用的酶标仪(如 Molecular Devices、Tecan sunrise、Thermo MultiSkan ET 等品牌),支持 405nm 波长动态读数和 37℃恒温孵育。操作流程上,rCR 的样品处理、试剂混合、加样孵育等步骤与天然鲎试剂一致,实验室无需重新培训操作人员或修改 SOP。显色系统方面,rCR 沿用与天然试剂相同的 PNA 显色底物,通过黄色信号变化定量,检测原理和数据分析方法保持不变。这种高度兼容性使实验室能快速完成方法验证和切换,加速重组试剂的合规应用进程。
内毒素检测需关注制剂成分,螯合剂和表面活性剂可能诱发“低内毒素回收(LER)”。江苏内毒素检测凝胶法鲎试剂
细菌内毒素工作品若效价误差或不稳定,将影响实验结果。江苏内毒素检测凝胶法鲎试剂
湖州申科针对 LER 提供多平台内毒素检测解决方案,适配不同成因的 LER 问题:一是鲎试剂配套增强剂,通过添加分散剂、过量二价阳离子,改善 LPS 聚集体状态,提升回收率;二是重组鲎试剂(rCR),无 G 因子干扰,完全模拟天然鲎级联反应,灵敏度达 0.005EU/mL,易与天然方法桥接;三是重组 C 因子(rFC),灵敏度 0.005-5EU/mL,性状稳定,适配特定基质;四是 单核细胞活化反应测定(MAT)法,通过检测 IL-6 覆盖全热原,不受 LPS 结构变化影响;五是质谱技术,验证基质残留对检测的干扰。多平台协同确保内毒素检测准确可靠。
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