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上海CHO-K1宿主细胞蛋白（HCP）残留检测
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发布时间：2025年08月21日
中国仓鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary，CHO）是抗体、重组蛋白、疫苗等生物制品生产中普遍使用的动物细胞表达系统。在使用CHO宿主生产过程中，不可避免的会引入宿主细胞蛋白（HCP）杂质，即使较低残留水平下，HCPs也会存在免疫原性，降低产品蛋白稳定性等的风险。因此需对生物制品中残留的HCP进行定量分析，以保证纯化工艺的一致性和终产品的安全性。SHENTEK®CHO HCP检测试剂盒实现关键试剂全国产化，采用CHO 细胞（K1&S）补料分批培养工艺制备HCPs 免疫绵羊，获得专门的抗体，用于CHO细胞系表达的生物制品(单抗，重组蛋白，疫苗等)中宿主细胞蛋白的残留检测。本试剂盒操作步骤少、快速、检测专一性强、性能稳定可靠。
抗体覆盖率是 HCP 检测关键指标，影响结果可信度，需通过方法验证。上海CHO-K1宿主细胞蛋白（HCP）残留检测
湖州申科在宿主细胞蛋白（HCP）ELISA检测技术领域拥有深厚的积累，已成功构建高质量、全流程的自有开发平台，覆盖HCP检测试剂盒研发的关键环节：①抗原表征与制备：基于合规平台的HCP Reference/Antigen制备能力，采用2D凝胶电泳等先进技术确保抗原库的代表性。②动物免疫与抗体制备：依托自有免疫动物平台，控制免疫原设计与动物免疫过程，产出高特异性、广覆盖度的抗体。③体系开发与验证：凭借成熟的技术经验开发高灵敏度、高稳定性的检测体系，并严格遵循GMP标准完成方法学验证。该平台通过全流程自主可控的技术整合，从源头保证试剂盒性能的一致性与可靠性，明显降低不同批次试剂盒的检测变异性。其研发的HCP ELISA试剂盒已成功服务于国内外200余家生物医药企业，为生物制品（如单抗、疫苗）的工艺开发、质量控制及法规申报（如IND/BLA）提供符合监管要求的定制化检测解决方案。
广东ELISA法宿主细胞蛋白（HCP）残留检测抗体覆盖率验证定制化宿主细胞蛋白残留检测试剂盒产生的HCP抗体特异性更好，能检出高风险HCP。
按照美国药典1132章节的要求，HCPs校准品需满足代表性要求，即能覆盖实际工艺产品生产中的HCPs。从HCP免疫检测方法使用目的和预期风险管理要求考虑，满足工艺开发和验证，同时为了应对下游工艺中潜在的异常工艺失效，或工艺变更需求，建议采用上游发酵工艺末端，如澄清处理后工艺点的样本作为HCPs的来源。在实际制备中，可采用空细胞或空载细胞在模拟实际工艺的预定条件进行采集，通过二维电泳或高分辨率质谱等蛋白质组学方法进行模拟工艺和实际工艺下HCPs的代表性表征分析。越靠近下游HCPs蛋白种类越少，也越接近DS中HCPs，但是其可能无法满足工艺开发和验证需求，也无法保证工艺的潜在风险，往往不推荐使用，或只作为上游工艺HCPs免疫检测法的辅助使用。
对宿主细胞蛋白残留的监测是生物药物生产中一个至关重要的质量属性（Critical Quality Attribute, CQA），它要求在药物的开发和生产阶段对HCP的存在进行严格的监控、管理和记录。随着生产流程，生物制品的目标蛋白纯度逐渐提高，相应地，HCP的含量在持续降低。这使得在富含目标蛋白，如单抗、融合蛋白等下游工艺样品在对HCP进行分析和监测就变得更加具有挑战性。在这种情况下，高效的HCP富集材料和技术变得尤为关键。SHENTEK®AbunProteoX是一种基于磁珠构建的亲和配体，可高效识别并结合目标蛋白。利用磁性纳米颗粒的独特性质，能够快速且有效地捕获HCP，显著提高检测灵敏度。此外，亲和配体的普遍适用性使得AbunProteoX在处理多种生物样本时都能表现出色，确保了在样品中存在高浓度目标蛋白时对低浓度HCP进行质谱、电泳等检测分析的准确性和可靠性。 湖州申科生物目前已承接常见宿主类型的HCP定制化开发，如期交付率达到100%。
LC-MS技术作为生物制品宿主细胞蛋白残留检测新趋势，需考虑以下几点：①稳定性：需要HCPs LC-MS检测流程进行验证，全流程都需要有严格的QC控制，确保检测结果的一致性和稳定性。②可重复性：不同类型生物制品中HCPs提取效率不同，不同人员操作存在差异，需要在上机前通过不同方法评估HCPs的提取效率，避免人为因素造成结果重复性差。③准确度：方法开发与验证阶段，通过设立内标与定量算法，根据内标响应回算得到HCPs的含量，确保定量结果的准确性。④抗干扰能力：高丰度蛋白和特殊基质会对质谱检测产生影响，需要通过前处理手段对高丰度蛋白或特殊的基质进行去除，以减少其对HCPs肽段在质谱检测时的影响。⑤真实性：样品中除HCPs以外的物质在质谱分析中同样会产生质谱信号，需要去除复杂的背景噪音避免假阳性和假阴性的出现，建立合理标准的生信分析流程。分析流程建立过程中同样需要建立严格的质控QC标准，并通过后期不同方法进行验证，确定其标准的真实性。
抗体覆盖率评估属于定性分析，要求是稳定性好，灵敏度高，与ELISA检测的原理相似，确保结果准确可靠。上海CHO-K1宿主细胞蛋白（HCP）残留检测HCP 定制化开发需构建成熟平台、技术实力、合规体系、稳定供应、专业团队及成功案例的全维度支撑体系。上海CHO-K1宿主细胞蛋白（HCP）残留检测
宿主细胞蛋白（HCP）作为生物制品中来源于细胞基质的残留杂质，具有明显的异质性特征。其复杂性体现在三个方面：①理化特性差异：HCP涵盖胞内及分泌蛋白，涉及关键生理功能，具有涵盖区间大的等电点（pI 3-11）、分子量范围（5-250kDa）及疏水性；②上游工艺影响：不同发酵工艺（如细胞株、培养条件）诱导独特的翻译后修饰（PTM），导致HCP总量与生化复杂性增加；③下游工艺与产物特性干扰：抗体、细胞因子等重组蛋白或病毒类药物的纯化工艺会选择性残留特定HCP，且产物形式（如大肠杆菌的包涵体/可溶性表达）直接影响HCP残留谱。针对特定生产工艺开发定制化检测方案是准确监控宿主细胞蛋白残留的关键。
上海CHO-K1宿主细胞蛋白（HCP）残留检测
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