江苏生物制品内毒素检测方法验证
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发布时间:2025年10月13日
湖州申科生物动态显色法鲎试剂用于定量测定人用和动物用注射药物、生物制品及医疗器械等样本中的细菌内毒素的含量。 细菌内毒素能特异性地活化反应主剂中的 C 因子,活化的 C 因子活化 B 因子,活化的 B 因子进而活化凝固酶原,凝固酶水解反应中的显色底物,产生游离的pNA(对硝基苯胺)从而引起吸光度变化,根据动态检测溶液吸光度变化率对内毒素进行定量。本品能够快速、高灵敏度地定量检测样品中的内毒素水平,适用于各种实验室和工业生产场景,确保产品质量和安全性。
内毒素检测中,脂多糖(LPS) 聚集体过度变小(近单体)可能降低检测信号。江苏生物制品内毒素检测方法验证
内毒素检测常与热原检测混淆,二者既有关联又有区别:热原是指所有能引起发热的物质(包括内毒素、病毒、真菌等),通过传统家兔热原试验检测;内毒素是热原的主要成分(占 90% 以上),检测更具特异性。目前,家兔热原试验因操作复杂、动物成本高,已逐渐被单核细胞活化反应测定法(MAT)替代,但部分产品(如放射性质药物、血液制品)仍需保留家兔试验作为补充。法规要求内毒素检测结果需与热原风险关联,若内毒素检测合格但临床出现热原反应,需排查是否存在非内毒素类热原,通过联合检测确保产品安全性。
江苏生物制品内毒素检测方法验证细菌内毒素检测中,rCR 对高蛋白(如单抗、FBS)、细胞培养上清等特殊样本适配性好。
当实验室更换内毒素检测方法或更换试剂供应商时,需进行方法比对与桥接验证。比对实验需选取至少 3批代表性样品,分别用新旧方法检测,计算结果相关性(如相关系数 R²≥0.95)和偏差(≤20%)。桥接验证还需评估新方法的特异性、灵敏度是否与旧方法一致,如确认对高风险样品(如含 β- 葡聚糖的样品)的抗干扰能力相当。若方法变更涉及法规申报产品,需将验证数据纳入申报资料,证明变更后方法仍能有效控制内毒素风险,符合 FDA、NMPA 等监管机构对方法变更的合规性要求。
湖州申科生物细菌内毒素工作标准品(CSE)源自大肠杆菌(E.coli O111:B4),经过提取精制获得脂多糖,并以细菌内毒素国家标准品为基准标定效价,每支效价处于 10 - 100EU ,量值准确且可靠。在工业内毒素检测中,该标准品应用广且关键。首先,能用于鲎试剂灵敏度复核实验,帮助检测人员准确确认鲎试剂对细菌内毒素的敏感程度,保障检测方法的有效性;其次,可开展干扰试验,评估样品中可能存在的干扰物质对检测结果的影响,以便优化检测流程和方法;再者,能充当各种阳性对照,为检测过程提供参照,确保检测结果的准确性与可靠性。这款标准品不仅适用于凝胶法鲎试剂系列实验,在光度法鲎试剂系列实验中同样能发挥重要作用。使用时,只需参照中国药典2025版第四部通则 1143 的相关介绍进行操作即可。凭借效价标定准确和适用性的优势,该标准品为生物制品、化学药品等各类样品的细菌内毒素检测提供了稳定且可靠的标准,助力企业和检测机构严格把控产品质量,满足法规要求。
样本含内毒素结合物时,可尝试用分散剂减少抑制,保障内毒素正常检出。
在內毒素检测的技术体系中,凝胶法与动态显色法基于不同原理与特性,形成互补应用格局。凝胶法依托鲎试剂与内毒素的凝集反应,实现定性或半定量检测,其灵敏度覆盖 0.03EU/ml、0.06EU/ml 等多梯度,60 分钟即可完成反应;检测结果依赖肉眼观察(180° 倒转判读凝胶形成),数据需手工记录,配套 内毒素凝胶法测定仪(恒温仪) 即可开展,虽自动化程度有限,但操作简洁,适用于生产环节的快速初筛。与之相比,动态显色法通过监测反应混合物吸光度或透光率的变化(如达预设检测值的反应时间、信号增速)实现 定量检测 ,灵敏度拓展至 5-0.005EU/ml ,60-90 分钟反应时长虽略长,却可借助酶标仪或全自动内毒素检测分析仪完成全流程自动化操作—软件实时采集数据,契合药品生产质量管理规范(GMP)对数据追溯与精度的要求。二者各有侧重:凝胶法以 “快速定性” 服务基础防控,动态显色法凭 “准确定量 + 自动化” 支撑严苛质控,共同为內毒素检测提供灵活适配的技术路径。
凝胶法鲎试剂通过观察凝胶形成定性内毒素,操作简便,适合医疗器械内毒素检测初筛。江苏原料药内毒素检测
内毒素检测假阴性多因样品抑制,梯度稀释结合加标试验可定位偏差原因。江苏生物制品内毒素检测方法验证
在为新物料或新产品、中间产品建立细菌内毒素检测方法时,常会遇到各种困难,尤其是尚处于新药研发早期阶段的药物。此时,由于药物制剂、缓冲系统等还不稳定,经常会发生变化,这样就给方法的建立带来了不同程度的影响。在建立细菌内毒素检查法之前,须尽可能多地了解有关该药品的基本信息,例如:有关样品的可溶性信息、推荐的稀释液、在水中的溶解度以及合适溶剂,样品的pH范围,分子量大小;如果是蛋白产品,还要了解该产品的等电点,产品规格、体积或重量,拟用于临床的用法和用量等,以便选择合适的样品处理方法和内毒素检测方法。
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