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江苏疫苗内毒素检测抗干扰方案

来源: 发布时间:2025年10月05日

低内毒素回收(LER)与传统鲎试剂干扰(抑制 / 增强)在多维度存在差异,准确区分对优化内毒素检测至关重要。表现上,LER 是内毒素回收率<50%,传统干扰是反应抑制或增强;成因上,LER 由螯合剂 + 表面活性剂协同或蛋白质电荷结合引发,传统干扰因 pH、β- 葡聚糖等导致;排除方式上,LER 时间依赖且无法稀释解决,传统干扰浓度依赖且可通过稀释缓解;确认方法上,LER 需通过保存时间研究(HTS),传统干扰按药典干扰实验评估。明确这些区别能帮助企业排查内毒素检测异常,避免误将 LER 当作普通干扰处理。
细菌内毒素检查用水需符合灭菌注射用水标准,内毒素含量有明确限值且无干扰。江苏疫苗内毒素检测抗干扰方案

江苏疫苗内毒素检测抗干扰方案,内毒素检测

随着生物制药行业的快速发展,注射用药剂、疫苗等制剂及植入性医疗器械的生产需求激增,直接推动了内毒素检测试剂的市场需求。然而,传统内毒素检测严重依赖天然鲎试剂,而全球鲎资源正面临衰减危机。2021 年 2 月,我国国家林业和草原局、农业农村部联合公告将鲎科动物列为国家二级保护动物,严格限制捕捞配额,导致天然鲎试剂价格持续上涨,甚至出现关键检测环节的供应短缺问题。在此背景下,湖州申科研发的重组级联试剂(rCR)通过基因工程技术实现无动物源性生产,彻底摆脱对鲎血资源的依赖。该试剂支持 “减少、替代、优化” 的 3R 动物保护原则,不仅解决了资源受限的行业痛点,还能保障长期稳定供应,为内毒素检测领域的可持续发展提供了理想解决方案。
上海疫苗内毒素检测动态显色法鲎试剂内毒素工作标准品(CSE)稀释液配制时涡旋很重要,可使内毒素充分溶解,保证浓度准确。

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生物制品(如单抗、疫苗、重组蛋白)注射剂因直接进入人体,对细菌内毒素残留限值要求严苛(通常≤0.5 EU/mg 或更低),检测面临基质复杂、干扰物质多等挑战。样品中常见的蛋白质、螯合剂、表面活性剂等可能抑制或增强 LAL 反应,需通过预处理消除干扰:如采用稀释法降低基质浓度、添加中和剂(如 Mg²⁺)修复反应体系,或使用热灭活去除蛋白类干扰物。此外,生物制品生产全流程需进行内毒素监控,从细胞培养上清、纯化中间品到终产品均需检测,确保工艺去除内毒素的有效性,符合 ICH Q6B 等法规对 “关键质量属性” 的控制要求。

医疗器械(如输液器、注射器、植入式设备)若携带内毒素,可能通过血液、组织接触引发异常反应或炎症反应。其检测需遵循 “模拟临床使用” 原则:采用浸提液(如 0.9% 氯化钠溶液或注射用水)在 37℃±1℃下浸提器械表面内毒素,再通过 LAL 或 rFC 法检测浸提液。不同器械的内毒素限值差异明显:一次性输液器需≤0.5 EU/device,植入式心脏瓣膜则要求更严格(≤0.06 EU/device)。检测时需注意器械材质对浸提效率的影响,如塑料类器械可能吸附内毒素,需优化浸提时间(通常≥1 小时)或采用超声辅助提取,确保残留内毒素被充分检出。
细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖,细菌死亡裂解释放,微量级即致人体发热、休克等威胁。

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内毒素检测法规体系正逐步向非动物源试剂倾斜,为重组试剂的应用铺平道路。美国药典(USP)已将重组 C 因子(rFC)和重组级联试剂(rCR)正式收录,于2025 年 5 月纳入 USP-NF,明确要求用户验证重组试剂对特定产品的适用性。欧洲药典(EP)通则 2.6.32 已收录重组 C 因子法,规定注射用水和纯化水可直接采用该方法检测,复杂基质样品需通过验证后使用。日本药原则通过指导原则<G4-4-180>将重组蛋白试剂列为内毒素检测的补充方法。中国药典虽暂未正式收录重组方法,但 9251《细菌内毒素法应用指导原则》为其应用提供了框架。这些法规进展共同构建了重组试剂的合规应用基础。
重组鲎试剂无动物源,支持 3R 原则,批次差异小,适配动态显色法酶标仪。浙江医疗器械内毒素检测抗干扰方案

细菌内毒素检查有凝胶法和光度测定法,结果有争议时,除规定外以凝胶限度试验为准。江苏疫苗内毒素检测抗干扰方案

湖州申科生物重组级联试剂(rCR)采用基因工程技术合成,完全模拟了天然鲎试剂中的酶促级联放大反应。重组鲎试剂反应体系中包含重组C因子、重组B因子和重组凝固酶原。当供试品中存在内毒素,重组C因子识别内毒素后活化,会依次级联活化下游重组B因子和重组凝固酶原。凝固酶原转化为具有生物活性的凝固酶后,识别并催化下游带显色基团的底物产生显色反应。显色反应的强度和内毒素浓度成正相关,从而定量检测内毒素。本产品用于定量测定人用和动物用注射药物、生物制品及医疗器械等样品中的细菌内毒素的含量。
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