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化学制药热原检测合规申报
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发布时间：2025年12月10日
相较于传统家兔法，热原检测MAT法在动物福利、检测性能、适用范围等方面具有明显优势。从动物福利看，MAT法使用分离培养的单核细胞系（如湖州申科 HL-60 细胞系），无需动物，完全符合 “减少、替代、优化” 的 3R 原则，规避家兔法的伦理争议与饲养成本。检测性能上，家兔法只能定性且灵敏度低（检测限≥5EU/kg），结果受动物个体差异、环境温度影响大；MAT 法可定量检测，标曲线性范围 0.0125-1.0EU/mL，检测限（LOD）达 0.0125EU/mL，批间 CV≤25%，重复性更优。适用范围方面，家兔法不适用于放射性质药物、基因疗法制剂等可能影响动物体温的产品；MAT法适配疫苗、血制品、抗体药、化药等几乎所有类型样品，且支持高通量检测，单块 96 孔板可同时分析多个样品，检测时间从家兔法的3-7天缩短至1.5天，大幅提升效率。
单核细胞活化反应试验（MAT）利用人源细胞释放IL-6等因子，可同时检出病毒、真菌等非内毒素热原。化学制药热原检测合规申报
MAT 法热原检测的关键机制是 “热原活化单核细胞 TLR 受体，触发炎症因子分泌”，TLR 受体的全覆盖是保障检测无遗漏的关键。不同热原需活化不同 TLR 受体：最常见的内毒素（LPS）主要活化 TLR4，而革兰氏阳性菌的非内毒素热原（如脂磷壁酸）需活化 TLR2/6，真菌多糖活化 TLR2/4，病毒核酸活化 TLR3/7/8 等。因此，MAT 试剂盒配套细胞需具备全覆盖的 TLR 受体表达—湖州申科生物通过 Western blot 验证，其 HL-60 细胞系表达 TLR1-TLR9，可响应各类热原。为进一步验证覆盖能力，申科用不同非内毒素热原配体（如脂磷壁酸、酵母多糖）刺激细胞，结果显示所有配体均能诱导 IL-6 分泌，且呈良好量效关系，证明试剂盒可检出各类热原。若细胞 TLR 受体覆盖不全（如缺失 TLR2），则无法检测革兰氏阳性菌的非内毒素热原，导致漏检风险，因此 TLR 受体的全覆盖是 MAT 法热原检测的关键技术指标之一。
江苏抗体药物热原检测技术升级保持细胞活性稳定，是实现准确热原检测的基础条件。
PBMC（外周血单个核细胞）的复杂制备流程严重制约热原检测效率。首先，血源获取受献血者数量、时间及采集血液政策限制，无法按需即时获取；其次，需严格执行 EP2.6.30 规定的标志物检测，增加前期准备时间；再进行采集血液、分离单核细胞、冻存等环节需全程无菌操作，步骤繁琐且易引入污染风险。相比之下，单核细胞系可工业化培养，制备流程简单可控，能快速提供合格细胞，避免因 PBMC 制备延误热原检测进度，更适配批量样品的高效质控。
PyroSHENTEK®热原检测试剂盒依据 ICH Q2 (R2)、《中国药典》（如通则 9301）及欧洲药典（EP 2.6.30）要求，完成了线性、范围、定量限、准确度、精密度、耐用性等全维度性能验证。线性方面，0.0125-1.0EU/mL范围内拟合良好，R²≥0.98；准确度通过加标回收实验验证，不同样品基质（如生物制品、化学制药原料）的回收率均落在 50%-200% 区间；精密度表现优异，批内与批间 CV 均≤15%，且无论是 3 复孔还是 4 复孔检测均能达标。此外，试剂盒使用中国药典推荐的 MAT 特定标准品，可直接用于国内外申报，契合全球 “3R 原则” 监管导向—尤其适配《欧洲药典》删除家兔法、《美国药典》鼓励 MAT 替代等新法规趋势，为企业应对不同地区的热原检测合规要求提供有力支持。
MAT 法检测革兰氏阳性菌注射剂，需排查非内毒素热原（如 LTA），避免只测内毒素漏检。
湖州申科生物MAT试剂盒配套的即用型细胞，需严格遵循解冻与使用规范，避免细胞活性下降影响热原检测结果。首先，解冻操作需快速：从液氮罐或 - 80℃冰箱取出细胞后，立即放入 37℃水浴锅快速解冻（约 1-2 分钟），避免缓慢解冻导致细胞内形成冰晶，损伤细胞膜；解冻后需立即取出，用 75% 酒精擦拭管外壁消毒，防止污染。其次，细胞解冻后需一次性使用完毕，不建议按量添加培养基或添加剂后分次使用—即用型细胞经工艺优化，活性与浓度已预调，分次使用会导致细胞状态不均（如部分细胞活化、部分休眠），影响热原反应性。使用时需严格按说明书操作：将解冻后的细胞直接加入含样品的微孔板中，无需额外洗涤或稀释，若样品为高浓度基质，可提前用无热原培养基稀释样品（不超 MVD），但细胞不可稀释。此外，解冻后的细胞需在 30 分钟内完成加样，避免室温放置过久导致细胞活性下降，若无法及时加样，需置于 37℃培养箱暂存，但不超过 1 小时，确保细胞用于热原检测时处于较好的活性状态。
热原检测采用人外周血单核细胞（PBMC），优势是天然受体谱系完整，但供体差异导致变异系数（CV）高达25%。化学制药热原检测合规申报凭借深厚的专业积累，湖州申科生物为行业提供可靠的热原检测解决方案。化学制药热原检测合规申报
热原是指微量即可引发恒温动物体温异常升高的物质，分为内源性（如细胞因子）与外源性两类，外源性热原又涵盖微生物来源（革兰氏阴性菌脂多糖 LPS、革兰氏阳性菌脂磷壁酸 LTA、病毒、真菌等）与非微生物来源（灰尘、橡胶降解产物等）。传统细菌内毒素检查法（BET）只能检测革兰氏阴性菌的 LPS，无法覆盖非内毒素热原，而单核细胞活化试验（MAT）可弥补这一缺陷。其原理是：热原通过活化单核细胞表面的 Toll 样受体（TLR，如 TLR4 识别 LPS、TLR2/TLR6 识别 LTA），启动先天免疫反应，促使细胞释放 IL-6、TNF-α 等促炎细胞因子；随后采用 ELISA 法检测 IL-6 浓度，结合 LPS 标准曲线推算样品中总热原含量，实现对内毒素与非内毒素热原的同步检测，契合《中国药典》9301 指导原则中 全场景防控热原风险”的要求。
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