江苏高效热原检测合规申报
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发布时间:2025年10月21日
PyroSHENTEK®热原检测试剂盒突破传统检测方法局限,不仅能检测革兰氏阴性菌来源的内毒素,还可准确识别革兰氏阳性菌(脂磷壁酸 LTA)、病毒、真菌等产生的非内毒素热原(NEP),契合热原检测 “全风险覆盖” 的法规需求。其定量限低至 0.025EU/mL,实验数据显示,对 Flagellin、LTA、Resiquimod、Poly-IC 等多种 NEP 均能有效检出,且加标回收率稳定在 50%-200% 合格范围(如贝伐珠单抗注射液中 LTA 加标回收率 66.8%、Zysoman 加标回收率 113%)。此外,试剂盒联合了国内相关机构完成室间验证,与传统家兔热原试验(RPT)桥接结果高度一致 —— 如人用狂犬病疫苗(Vero 细胞)中 LPS 加标回收率 152.1%、人血白蛋白中 LPS 加标回收率 71.6%,检测数据科学性符合国际法规要求,助力企业无缝衔接中美欧等地申报标准。
湖州申科热原检测试剂盒联合了国内相关机构室间验证,与传统RPT法结果高度一致,符合法规要求。江苏高效热原检测合规申报
单核细胞系培养的高度可控性,为热原检测结果的可靠性提供关键保障。其培养基配方(如营养成分、血清浓度)可定制,确保细胞获取充足营养;培养环境(37℃、5% CO₂、湿度≥90%)可恒定控制,维持细胞好的活性与 TLR 受体表达水平,避免因环境波动导致细胞功能异常。这种可控性还能防止细胞遗传突变与外源污染(如支原体、病毒),确保不同批次单核细胞系的热原响应一致性,让热原检测结果批间差异小,符合 GMP 对检测方法稳定性的要求。
热原检测结果判定热原检测实验中,标准化培养基与恒定环境让单核细胞系活性稳定,避免PBMC冻存后的功能衰减。
MAT法热原检测中,非内毒素热原(NEP)对照品设为 “选做”,且试剂盒不默认配备,需结合检测需求灵活使用,背后有明确的设置逻辑。首先,试剂盒开发阶段已通过验证(用多种 NEP 配体刺激细胞),证明其可检出 NEP,后期实验是否加入 NEP 对照,只需根据内部管理要求或专业人员建议确定,无需强制设置;若产品产线明确无 NEP 污染风险(如只使用革兰氏阴性菌原料),可删除 NEP 对照,简化操作。其次,试剂盒不配备 NEP 对照品,是因不同用户需求差异大 —— 部分用户需检测特定 NEP(如脂磷壁酸),部分需检测广谱 NEP,因此提供单独购买选项,用户可按需选择,避免资源浪费。NEP 对照品的主要使用场景包括:一是方法验证阶段,用于确认试剂盒对 NEP 的响应性;二是产品工艺变更后,排查是否引入 NEP 污染;三是欧盟申报时,需证明方法可覆盖 NEP,此时需加入 NEP 对照品并显示阳性结果。若样品检测中 NEP 对照品阳性,而样品检测阴性,可排除 NEP 污染;若样品阳性,则需进一步鉴定热原类型。
热原是能引发恒温动物体温异常升高的物质总称,主要成分为细菌内毒素(革兰氏阴性菌脂多糖 LPS),同时涵盖病毒、真菌毒素、支原体等非内毒素热原,其检测是保障药品与医疗器械安全性的关键环节。当前热原检测已形成 “特异性检测 + 广谱筛查” 互补的完整体系:以鲎试验法(含天然 LAL 与重组 rCR/rFC 试剂)作为细菌内毒素的特异性检测手段,凭借 fg 级灵敏度成为制药行业常规质控方法,可通过凝胶法实现定性、动态浊度 / 显色法完成定量;以家兔热原试验作为传统广谱筛查方法,虽操作繁琐(需预试筛选基础体温稳定家兔,正式试验观察 3 小时体温变化),但仍是放射性质的药物、血液制品等高风险产品排除非内毒素热原的补充手段;以单核细胞活化反应测定(MAT)作为新兴全热原检测技术,利用人源单核细胞(如 THP-1 细胞)释放 IL-6、TNF-α 等细胞因子的特性,可同时识别内毒素与非内毒素热原,契合疫苗、基因治疗产品等对风险控制的需求。三种方法协同应用,从原料入厂到成品放行构建全流程热原防控网络,既保证对内毒素的准确监控,又避免非内毒素热原的遗漏风险。
热原具有顽强稳定性、耐热性(180℃/2h才能破坏)、水溶性、滤过性,可穿透常规灭菌屏障。
热原是指微量即可引发恒温动物体温异常升高的物质,分为内源性(如细胞因子)与外源性两类,外源性热原又涵盖微生物来源(革兰氏阴性菌脂多糖 LPS、革兰氏阳性菌脂磷壁酸 LTA、病毒、真菌等)与非微生物来源(灰尘、橡胶降解产物等)。传统细菌内毒素检查法(BET)只能检测革兰氏阴性菌的 LPS,无法覆盖非内毒素热原,而单核细胞活化试验(MAT)可弥补这一缺陷。其原理是:热原通过活化单核细胞表面的 Toll 样受体(TLR,如 TLR4 识别 LPS、TLR2/TLR6 识别 LTA),启动先天免疫反应,促使细胞释放 IL-6、TNF-α 等促炎细胞因子;随后采用 ELISA 法检测 IL-6 浓度,结合 LPS 标准曲线推算样品中总热原含量,实现对内毒素与非内毒素热原的同步检测,契合《中国药典》9301 指导原则中 全场景防控热原风险”的要求。
进行热原实验时,样品有效稀释倍数上限应通过干扰实验确定,既保护细胞活性又保证热原检测灵敏度。热原检测结果判定
中国药典规定 MAT 法标曲需 4 个平行孔、浓度点≥4,推荐四参数拟合,r≥0.90。江苏高效热原检测合规申报
PyroSHENTEK®热原检测试剂盒(货号 1502100,规格 96 测试 / 盒)优势在于搭载 MAT 特定单核细胞系,细胞表面表达多种 Toll 样受体(TLR),可响应不同类型热原。该细胞系来源清晰、可溯源,均一性强且无供体依赖,有效规避了传统 PBMC 因供体差异导致的结果波动,同时安全风险低,无需担忧外源因子污染。试剂盒采用 “标准化单核细胞 + ELISA 检测” 一体化体系,通过严格的细胞质量控制(如冻存复融后活率达标),确保每次检测的细胞状态一致;搭配预包被 IL-6 抗体的酶标板与配套试剂,进一步减少体系误差。从标曲数据来看,其拟合采用 4-Parameter Logistic 模型,R² 达 1.000,EC50 为 0.119EU/mL,参数置信区间稳定,复孔结果重复性优异,能为热原定量提供准确如一的数据支撑,避免因体系不稳定导致的检测偏差。
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