商机详情 -
上海血液制品热原检测欧盟出口方案
来源：
发布时间：2025年10月02日
单核细胞活化反应测定（MAT）是近年来热原检测领域的突破性技术，其原理基于人体免疫系统对热原的天然应答机制：人源单核细胞（如 THP-1 细胞系或新鲜人全血单核细胞）在热原刺激下，会活化胞内炎症信号通路，释放 IL-6、TNF-α 等促炎细胞因子，通过 ELISA 检测细胞因子的浓度，即可间接反映样品中热原的总量与活性。与传统检测方法相比，MAT 法具备三大不可替代的优势：一是广谱性，可同时检测细菌内毒素、病毒、真菌毒素、支原体等所有类型热原，填补了鲎试验法只能检测内毒素的 “非内毒素热原盲区”，尤其适用于疫苗、基因治疗产品等易受多种热原污染的高风险产品；二是人源相关性，采用与人体同源的细胞模型，检测结果更贴近临床实际热原反应，避免家兔试验中动物种属差异导致的误判；三是高灵敏度，对细菌内毒素的检测限可达 0.0125EU/mL，对非内毒素热原（如酵母多糖、腺病毒）的检测限低至 ng/pg 级，满足低限值产品的质控需求。
在药品安全语境中，热原特指细菌性热原—微生物代谢产物、细菌尸体及内毒素的统称。上海血液制品热原检测欧盟出口方案
PBMC（外周血单个核细胞）的供体差异会直接导致热原检测结果的波动，主要体现在 IL-6 释放水平的不一致。不同供体的 PBMC，其单核细胞比例、TLR 受体表达量、免疫活性状态存在差异：有的供体 PBMC 受热原刺激后， IL-6 释放量高；有的则极低，甚至无明显响应。实验数据显示， PBMC 的标曲各浓度点相对偏差有高达 171.43%的，正是这种差异的体现，导致热原检测结果难以标准化，无法准确判断供试品热原是否超标，从而增加了药品的质量控制风险。
浙江热原检测法规要求MAT 热原检测能帮助分析和解决生物制品生产中出现的低内毒素回收（LER）现象。
在 MAT 法热原检测中，PBMC（外周血单核细胞）与单核细胞系各有优劣，单核细胞系更适合标准化检测。PBMC 的优势在于免疫细胞成分丰富（含单核细胞、淋巴细胞等），对热原反应敏感，灵敏度相对较高；但局限同样明显 ——PBMC 需从不同供体获取，供体免疫状态差异会导致检测结果不稳定，且无法长期保存，难以建立标准化方法学。单核细胞系（如 HL-60、MM6、THP1）则克服了 PBMC 的局限：细胞来源稳定（可批量培养），TLR 受体表达覆盖主要亚型（如 HL-60 表达 TLR1-TLR9），对热原反应重复性好，更适合商业化试剂盒与法规检测。不同单核细胞系性能也有差异：MM6/IL-6 法检测限约 0.05EU/mL，THP1/TNF-α 法因 TNF-α 为一级免疫效应物检测限更低，但 TNF-α 稳定性差；HL-60/IL-6 法检测限与稳定性均优于前两者，成为主流选择。湖州申科生物MAT试剂盒选用 HL-60 细胞系，正是基于其优异的稳定性与热原响应适配多场景，确保不同批次检测结果一致。
MAT 法热原检测背景值偏高会干扰结果判读，需从试剂、操作两方面解决。试剂相关问题中，非特异性活化（如试剂含微量热原）会导致细胞异常分泌 IL-6，需选用低内毒素的试剂与耗材；检测试剂添加过多（如抗体浓度过高）会增加非特异性结合，需按说明书稀释试剂或降低推荐浓度。操作环节问题更多见：孔洗涤不充分会残留未结合抗体与酶，需按方案完成规定洗涤次数（如 3-5 次），确保洗涤液充分浸润孔底；洗涤缓冲液污染（如滋生微生物）会引入外源信号，需现配现用缓冲液；加终止液后读板延迟（超 10 分钟），会因黄色产物降解导致背景虚高，需加终止液后立即读板；底物孵育时见光会引发非特异性显色，需在避光环境下进行 TMB 孵育；孔板底部脏（如残留指纹、液体痕迹）会影响光吸收，需用无尘纸清洁孔板底部后再读板。通过以上措施，可有效降低背景值，确保检测信号的真实性，避免因背景干扰导致热原浓度误判。
单核细胞活化试验（MAT）将热原检测从经验性观察，推进至受体-配体相互作用的分子本质。
PyroSHENTEK®热原检测试剂盒（货号 1502100，规格 96 测试 / 盒）优势在于搭载 MAT 特定单核细胞系，细胞表面表达多种 Toll 样受体（TLR），可响应不同类型热原。该细胞系来源清晰、可溯源，均一性强且无供体依赖，有效规避了传统 PBMC 因供体差异导致的结果波动，同时安全风险低，无需担忧外源因子污染。试剂盒采用 “标准化单核细胞 + ELISA 检测” 一体化体系，通过严格的细胞质量控制（如冻存复融后活率达标），确保每次检测的细胞状态一致；搭配预包被 IL-6 抗体的酶标板与配套试剂，进一步减少体系误差。从标曲数据来看，其拟合采用 4-Parameter Logistic 模型，R² 达 1.000，EC50 为 0.119EU/mL，参数置信区间稳定，复孔结果重复性优异，能为热原定量提供准确如一的数据支撑，避免因体系不稳定导致的检测偏差。
无论是注射剂、生物制品，还是医疗器械的接触材料，都能在我们的热原检测下，得到准确的“安全认证”。江苏原料药热原检测技术升级欧洲药典通则 2.6.30 明确 MAT 可替代家兔法热原检查，能同时检测内毒素与非内毒素热原。上海血液制品热原检测欧盟出口方案
MAT法热原检测中，非内毒素热原（NEP）对照品设为 “选做”，且试剂盒不默认配备，需结合检测需求灵活使用，背后有明确的设置逻辑。首先，试剂盒开发阶段已通过验证（用多种 NEP 配体刺激细胞），证明其可检出 NEP，后期实验是否加入 NEP 对照，只需根据内部管理要求或专业人员建议确定，无需强制设置；若产品产线明确无 NEP 污染风险（如只使用革兰氏阴性菌原料），可删除 NEP 对照，简化操作。其次，试剂盒不配备 NEP 对照品，是因不同用户需求差异大 —— 部分用户需检测特定 NEP（如脂磷壁酸），部分需检测广谱 NEP，因此提供单独购买选项，用户可按需选择，避免资源浪费。NEP 对照品的主要使用场景包括：一是方法验证阶段，用于确认试剂盒对 NEP 的响应性；二是产品工艺变更后，排查是否引入 NEP 污染；三是欧盟申报时，需证明方法可覆盖 NEP，此时需加入 NEP 对照品并显示阳性结果。若样品检测中 NEP 对照品阳性，而样品检测阴性，可排除 NEP 污染；若样品阳性，则需进一步鉴定热原类型。
上海血液制品热原检测欧盟出口方案
上一篇：
江苏重组蛋白内毒素检测技术升级
下一篇：
高效热原检测MAT试剂盒