Superdex系列是凝胶过滤精纯化的前列填料,采用葡聚糖与琼脂糖复合基质,兼具高分辨率(理论塔板数>30,000/m)和刚性结构。其粒径13 μm,分离范围涵盖Mr 1,000-600,000,特别...
根据处理规模和操作目的,层析柱可分为分析型、制备型和工业生产型。分析型层析柱通常内径较小(1-4.6毫米),柱长短,填料粒径细(如1.7-5微米),旨在使用极少量样品(微升级)实现高分辨率、高灵敏度的...
对于一些非常不稳定的蛋白质,传统的多步纯化流程可能导致活性大量丧失。此时,可以采用“稳定性指导”的策略。其主要思想是,在工艺开发的每一个阶段,都将蛋白质的稳定性(半衰期)作为一个关键指标来筛选条件。这...
环境分析要求从复杂基质(如水样、土壤提取物、大气颗粒物)中检测极低浓度的污染物(如农药残留、多环芳烃、重金属形态、内分泌干扰物)。层析柱在此过程中扮演双重角色:首先是作为样品前处理工具,例如使用固相萃...
蛋白纯化填料,或称层析介质,是生物分离技术的重要一环。它们是由固体基质(如琼脂糖、葡聚糖、纤维素或合成聚合物)与功能化配基化学键合而成的微球颗粒。这些填料被紧密填装在层析柱中,当含有目标蛋白的复杂样品...
离子交换层析柱通过静电相互作用分离带电分子,其固定相表面共价键合带有正电或负电的官能团。在特定pH条件下,目标蛋白与填料带相反电荷而结合,通过增加盐浓度或改变pH值实现阶梯或线性梯度洗脱。这种技术具有...
填料的基质材料是决定其物理化学性能的基础。传统软胶如琼脂糖(Sepharose)和葡聚糖(Sephadex),具有亲水性强、生物相容性好的优点,但机械强度低,不耐高压,主要用于低压层析。刚性基质如交联...
层析柱在生物制药领域具有不可替代的应用价值,是药物研发和生产过程中目标产物分离纯化的设备。在重组蛋白药物、抗体药物、疫苗等生物制品的生产中,层析柱可实现对目标生物大分子的富集、纯化和精制,去除杂质(如...
智能响应填料通过温度或pH敏感聚合物接枝,实现无盐洗脱,颠覆传统层析依赖盐梯度的模式。温敏型填料在37℃结合蛋白,4℃解离,避免高盐对蛋白活性的影响。pH响应型在结合pH 5.5,洗脱pH 7.0即可...
病毒安全性是血液制品和重组蛋白的强制性要求,病毒填料通过尺寸排阻和电荷双重机制实现>4 log的病毒去除。Mustang Q膜层析虽非传统填料,但其季胺功能化的超大孔结构对包膜和非包膜病毒均有效。Ba...
手性yao药物分离是层析柱技术的应用领域,对映体间物理化学性质几乎相同,在光学活性上差异。手性固定相(CSP)通过三点作用模型识别对映体,多糖衍生物涂覆硅胶是成功的CSP,可分离80%以上的手性化合物...
磁性层析填料将功能配基包覆在Fe₃O₄超顺磁微球表面,尺寸50 nm-5 μm,通过外加磁场实现快速分离,无需装柱和离心。Ni-NTA磁性琼脂糖珠和Protein A磁珠已商业化,载量10-40 mg...
手性yao药物分离是层析柱技术的应用领域,对映体间物理化学性质几乎相同,在光学活性上差异。手性固定相(CSP)通过三点作用模型识别对映体,多糖衍生物涂覆硅胶是成功的CSP,可分离80%以上的手性化合物...
制备型层析柱与分析型在设计上存在本质差异,前者追求载样量和通量,后者注重分辨率和灵敏度。制备柱的床层高度通常为15-30厘米,径高比大于1:5以保证处理量,而分析柱可达250毫米长,内径2.1-4.6...
Superdex系列是凝胶过滤精纯化的前列填料,采用葡聚糖与琼脂糖复合基质,兼具高分辨率(理论塔板数>30,000/m)和刚性结构。其粒径13 μm,分离范围涵盖Mr 1,000-600,000,特别...
凝胶过滤层析柱依据分子尺寸差异进行分离,其固定相是具有特定孔径分布的多聚糖或聚合物微球。大分子无法进入填料孔隙而快速通过柱体,小分子则因扩散进入孔隙而滞留更长时间。这种温和的分离机制不依赖化学作用,特...
层析技术是现代蛋白质纯化的支柱,其主要原理是利用蛋白质在固定相(层析介质)和流动相(缓冲液)之间分配的差异,因理化性质不同而产生迁移速率差,从而实现分离。固定相被填充在层析柱中,当蛋白质混合物随流动相...
动态光散射通过测量溶液中蛋白质分子布朗运动引起的激光散射光波动来估算其流体力学半径分布。在纯化中,DLS可用于快速评估样品单分散性:一个单分散的峰表明蛋白质处于均一、未聚集的状态,这对于结构生物学研究...
蛋白质聚集是纯化过程中常见的问题,表现为溶液浑浊或形成沉淀,导致活性丧失和产量下降。聚集可由多种应力引发:暴露于气-液界面(搅拌、起泡)、疏水表面吸附、反复冻融、过高浓度、偏离适pH或盐浓度等。抑制策...
疏水相互作用层析基于蛋白质表面疏水贴片的差异进行分离。在高盐浓度条件下,蛋白质表面的水化层被破坏,暴露出疏水区域,与介质上的疏水配基(如苯基、丁基)结合。随后通过逐步降低盐浓度,疏水性较弱的蛋白质较早...
表面等离子共振技术是一种无需标记的实时分析生物分子相互作用的强大技术。它将一种相互作用物固定于芯片表面,使另一种相互作用物流过芯片,SPR能实时检测结合和解离过程,从而精确测定动力学参数。在蛋白质纯化...
膜过滤根据孔径大小和分离机制的不同,在纯化流程的不同阶段发挥着多种作用。微滤(0.1-10 μm)用于澄清,去除细胞碎片和大的颗粒物。超滤(UF)是依据分子量截留(MWCO, 通常1-1000 kDa...
层析技术是现代蛋白质纯化的支柱,其主要原理是利用蛋白质在固定相(层析介质)和流动相(缓冲液)之间分配的差异,因理化性质不同而产生迁移速率差,从而实现分离。固定相被填充在层析柱中,当蛋白质混合物随流动相...
从实验室级别(毫克级)的工艺开发到工业生产(克/千克级)的放大,并非简单的几何尺寸放大,而是一个复杂的工程学挑战。放大过程中,流体动力学参数会发生改变。维持线性流速和柱床高度不变是常见策略,但柱直径的...
虽然SPR本身不是一种纯化技术,但它在纯化工艺开发,特别是亲和层析的开发和优化中扮演着关键角色。SPR能够实时、无标记地测量生物分子间(如抗原-抗体、受体-配体)的相互作用动力学,即结合速率常数(ka...
缓冲液是蛋白质纯化的“血液”,其选择对维持蛋白质稳定性、活性和分离效果至关重要。一个理想的缓冲系统需要考虑以下因素:1)缓冲试剂的选择,其pKa值应在目标pH值的±1范围内,且不与目标蛋白或树脂发生相...
以蛋白质结晶(用于X射线衍射结构解析)为目标的纯化过程,对蛋白质的“质量”提出了更高要求。这远不止是SDS-PAGE显示的单一条带。它要求蛋白质样品在化学上高度均一、构象高度均一、且处于单分散状态(即...
在现代自动化纯化系统中,集成多种在线检测器可以实时监控纯化进程。除了基本的紫外检测器,还包括在线电导率仪监测盐浓度、在线pH计监测酸碱度,甚至在线光散射和DLS检测器,能够实时判断样品单分散性和检测聚...
纯化得到的宝贵蛋白质需要妥善储存以维持其长期稳定性。储存条件取决于蛋白质的性质。短期储存(数天至数周)可在4°C下进行,并加入抗菌剂(如叠氮钠)。长期储存通常采用冷冻。快速冷冻并在-80°C保存是常用...
在现代自动化纯化系统中,集成多种在线检测器可以实时监控纯化进程。除了基本的紫外检测器,还包括在线电导率仪监测盐浓度、在线pH计监测酸碱度,甚至在线光散射和DLS检测器,能够实时判断样品单分散性和检测聚...