前沿性检查:目前不作为生育力低下男性初步评估的常规方法。这一部分包括了非常专业化的、主要用于研究的方法和其他新兴检测技术。有研究认为,氧化应激可能是影响人类精子功能和妊娠结局的重要因素;新的证据也表明了精子DNA完整性和染色质组装与生育力的关系。前沿性检查一节中详细介绍了精子氧化应激和活性氧实验、精子染色质检测(苯胺蓝和色霉素A3染色)的具体实验操作及讨论。手册重写了计算机辅助精子分析(CASA)部分,强调了CASA对于检测精子浓度的局限性与质控要求,增加了CASA检测精子超活化运动的内容。对精子跨膜离子流和转运的功能分析,可更好地了解男性不育因素和男性生殖***疾病。为此,手册新增了检测精子跨膜离子流和转运的内容。WHO第6版明确提出:使用CASA系统须遵循适当的程序步骤,才能获得可靠和可重复的结果。南京CASA精子分析频闪光源
CASA,即计算机辅助精子分析,是一种利用技术手段对精子活力、浓度和形态进行精确评估的方法。WHO第五版指南强调,相比人工检测,CASA提供更准确的数据和精子动力学参数,如前向运动和超活化运动,以及获能精子特征参数。研究显示,CASA检测的精子参数与体内外受精成功率和受孕时间有***关联。使用CASA分析仪,通常通过相差显微镜识别活动精子,适用于精子动力学分析。但要确保可靠结果,操作者需注意标本制备、帧频率、精子浓度等因素。每份样本至少需要分析200个活动精子的运动轨迹,更多精子样本有助于分类和变异性的分析。国内已有自主研发的精子分析仪,通常进行两次分析,每次至少200个精子,结果通过统计学分析得出。CASA在评估精子浓度时,需精确测量精子体积,确保**完全液化并充分混匀。计数板的精确性和计数一致性是关键,每次检测需满足5个视野和200条以上精子的比较低要求。对于高浓度**,可能需要稀释以减少误差。形态分析方面,CASA能够定量评估精子头部、中段和主段,尾部缺陷可通过活力评估。对于碎片过多或黏稠的**,可能需要洗涤以减少背景干扰。CASA中涉及一系列术语,如VCL(曲线速度)、VSL(直线速度)等,它们反映了精子运动的不同特性。南京计算机辅助精子分析频闪光源电脑全自动精子采集分析仪是一款高科技医疗设备,它巧妙地融合了现代计算机技术和自动控制技术。
1.基本检查:是确定精液变量稳定的常规方法,不仅是男科实验室,任何开展精液检查的实验室都能遵循。精子计数依然推荐使用改良Neubauer血细胞计数板的方法,但计数的方法有了改变。明确推荐了伊红笨胺黑染色法作为精子存活率诊断的优先方法,伊红染色和低渗肿胀实验只作为备选方法。删减了参考值下限的描述。对于精子活动率大于40%的样本没有必要做存活率评估。与第5版手册中淡粉色判读为活精子不同,明确了只有精子头为白色的精子为活精子、淡粉色为死精子。临床数据表明,鉴别快速前向运动精子非常重要。因此,关于精子活力分级,第6版手册建议恢复到快速前向运动、慢速前向运动、非前向运动和不活动4个活力级别,但精子活动率的参考值范围却依然是按前向运动(PR)、非前向运动(NP)、不活动(IM)3个活力级别计算。第6版手册强调,精子形态学评估的价值不仅在于其可用于判断自然妊娠和辅助生殖技术(ART)结局的预后,还可以为男性生殖***包括睾丸和附睾功能判断提供更多诊断信息。对于3%和5%的精子“正常”形态率的判断,则要求必须由训练有素的人员评估1500个精子来完成;对于无尾精子(只有头部的精子)超过总精子数20%的精液,应单独计算并在报告中注明;
医生为了鉴定男性生育能力,常嘱男方作精液检查,正常精液颜色为灰白色或乳白色。如节欲时间长者,可呈淡黄色,若出现鲜红色. 暗红色,则提示患者有炎症或生殖道损伤。每次排精量为2~6毫升,常受排精次数与频率的影响。新鲜精液呈稠厚胶冻状,1小时之内应液化为稀薄的液体,用一根小玻璃棒插入精液中再提起,所形成的精液丝长度一般不超过2厘米,否则视为异常。精液呈弱碱性,PH值为7.2~7.8。正常精子数应超过2000万/毫升。排精后1小时内活动精 >=50%。世界卫生组织推荐精子活动力分为四级:0级:不活动;1级:精子原地摆动;2级:有中等的前向运动;3级:前向运动活跃,快速直线运动。正常的精子活动力为2~3级的精子>=40%~50%.精子形态:畸形精子小于50%。分析男性生育能力不能单从精液的一项指标定论,应对精子数量 活力 活动率 液化时间 畸形率等多方面进行综合能力分析。 采集精液前5~7天内必须停止性生活,并且不得有**、梦遗等情况,还应禁烟戒酒,忌服对生精功能有影响的药物等。Hamilton Thorne精子分析仪具有良好的数据管理和报告生成功能,能够方便用户查阅和分享分析结果。
通过结果的生物学意义对结果质量进行评估当所有具生物学意义的参数在测试中表现出较小的可变性时则方法学可变性亦较低方法学可变性低则结果质量就高。CASA系统获得的数值与直观评估获得的数值进行分析和比较在精子数量和综合运动性上具有较好的相关性而·131·中国优生与遗传杂志2002第10卷第6期DOI:10.13404/j.cnki.cjbhh.2002.06.091在前向运动精子百分率上的相关性较低]。Holt等报道了在常规实验条件下采用五种不同的CASA系统对**参数值进行比较,其结果为:采用同一个测定池由不同的操作者测定**参数;变异系数(CV)是29%活动精子比率的CV为24%平均路径速度(VAP)的CV为43∙85%。作者们指出该分析结果不应看作是不同CASA系统间的工作情况的比较实际上它揭示了操作者的错误是差异的主要来源。目前有待于寻找进一步的标准来评估CASA变量的结果质量。精子***的生物学功能是使卵细胞授精因此用夫妇中的授精结果来考察精子运动性是合理的只有在该基础上能够确定活动性参数的重要性。辅助生殖技术(授精IVF)的发展使检测精子质量与各参数间的关系的比较成为可能;同样可以验证CASA测定结果与精子真实质量间的相关性有利于CASA结果质量的提高。IVOS和CEROS集成了智能化的分析软件,能够自动识别和计算精子的各项参数,减少了人工操作的误差。美国密度精子分析精子动力分析
HAMILTON THORNE精子分析仪可分析参数,摆动性(WOB):实际的曲线路径关于平均路径的摆动值。南京CASA精子分析频闪光源
人类精子冷冻保存和储存:增加了冷冻样本的安全性、精液冷冻保存方案、快速液氮熏蒸冷冻、冷冻精液的解冻、玻璃化冷冻等内容,更具可操作性。本手册对人类精子的冷冻保存提出了具体建议:将样本分管分罐分开储存;对使用的材料和留存标本建立定期核验程序;所有储罐都应有液位监控报警系统,以监测温度和液氮液位,传感器应连接警报器,可通过实验室人员的终端进行提醒。新证据表明,玻璃化冷冻是冷冻保存精液的一种有价值的方法。该方法的原理是将小体积样本与无污染液氮直接接触并快速冷冻,可以防止冰晶的形成,并减少精子的渗透性损伤。在麦管玻璃化冷冻(无菌玻璃化冷冻)中,也可以使用封闭系统,不需要无菌的液氮。南京CASA精子分析频闪光源