美国浓度精子分析W.H.O 6

方法:使用两种已知浓度的质控乳胶珠溶液,1份浓度为(35±5)×106/ml,另1份浓度为(18.0±2.5)×106/ml,评价4种计数方法的准确性和精确性,并比较4种方法计数精液的结果。结果:计数乳胶珠时,CellVU计数池的结果**接近已知浓度,分别为(39.70±4.76)、(19.09±2.02)×106/ml,变异系数(CV)值分别为12.80%和10.58%;血细胞计数池和Makler计数池结果均高于已知浓度,前者为(44.84±4.86)×106/ml、(21.04±1.87)×106/ml,CV值分别为10.81%和8.89%,后者为(52.36±7.78)×106/ml、(24.54±3.67)×106/ml,CV值分别为14.86%和14.96%;CASA系统结果低于已知浓度,为(28.53±2.06)、(14.62±0.95)×106/ml,但CV值比较低,分别为7.22%和6.50%。计数精液时,CellVU计数池与CASA系统结果差异无***性(P=0.71),分别为(45.28±34.52)、(41.96±31.93)×106/ml,血细胞计数池和Makler计数池结果差异无***性(P=0.14),分别为(76.98±59.90)、(63.89±53.84)×106/ml,CellVU计数池、CASA系统与血细胞计数池、Makler计数池结果间差异***(P<0.05或P<0.01)。结论:计数精液时,CASA系统与CellVU计数结果差异无***性。各实验室可选择合适的手工或CASA计数方法。CASA系统主要用于精子动力学的分析，可以评估精子的浓度、活力等参数。美国浓度精子分析W.H.O 6

二、生化及免疫学检验：5、精浆肉碱测定【正常参考值】浓度为239.56±l05.59umol/L。【临床意义】精浆肉碱测定精浆中的肉碱主要由附睾分泌，其次是精囊。精浆中肉碱分为游离肉碱和乙酰肉碱二种，附睾中含高浓度的肉碱，主要与精子在附睾成熟时所需的能量来源有关。现认为精浆肉碱含量和果糖含量的变化，常反映附睾、精囊的功能。精浆肉碱及果糖含量正常，表明附睾、精囊功能正常。当肉碱含量高于正常的50%，而果糖含量降低，则提示精囊功能障碍，附睾功能正常；精浆肉碱约为正常含量的50%左右，果糖含量正常，说明附睾功能障碍，精囊功能正常；而肉碱急剧下降，果糖含量亦减少，表示精囊、附睾功能均发生障碍。6、抗精子抗体(AsAb)测定【正常参考值】阴性。【临床意义】AsAb检测对不育原因检查有重要临床意义。存在于血清或生殖道分泌液中的AsAb，可抑制精子的活动，干扰精子的运行，阻碍精子穿透及精卵结合，使受精发生障碍。即使已经受精，也可能影响发育中的胚胎，造成免疫性流产。不育夫妇AsAb阳性者占25%-30%，当精子输出管道受阻、睾丸损伤、炎症、附睾等生殖系***时，系精子外逸而产生的自身抗体。美国浓度精子分析W.H.O 6传统的CASA系统仍使用传统阈值图像处理方法，准确率有待提高。

CASA系统虽然有诸多优点，但是很多因素都会影响到CASA仪器的使用及准确性。CASA系统进行**分析应注意以下几点：3.1标本的采集与制作（1）采集前禁欲2�7天，禁欲时间过长、过短对**质量都有一定影响。（2）容器要清洁。（3）特殊情况下，*可使用专门为采集**设计的无毒性避孕套，普通的乳胶避孕套因含有损害精子活力的物质不可使用。（4）注意保温（20�37℃），并于30分钟内送检验科。（5）标本置于37℃水浴.精子运动参数具有温度敏感性，因此要求计数池应于分析仪恒温板上预温。（6）密切注意**液化的情况，确保液化时间准确，因**样本随放置时间的延长，精子活动力及活动率有减少的趋势。标本液化后取混匀样本**1滴滴在样品池中间，然后进行分析。（7）检测精子活动力，标本密度应控制在2×106/ml到50×106/ml之间。具有高密度（如高于50×106/ml）精子的标本，通常会增加碰撞的频率，并可能由此出现错误的结果。在这种情况下，建议用同源精浆稀释标本。

人类精子冷冻保存和储存：增加了冷冻样本的安全性、精液冷冻保存方案、快速液氮熏蒸冷冻、冷冻精液的解冻、玻璃化冷冻等内容，更具可操作性。本手册对人类精子的冷冻保存提出了具体建议：将样本分管分罐分开储存；对使用的材料和留存标本建立定期核验程序；所有储罐都应有液位监控报警系统，以监测温度和液氮液位，传感器应连接警报器，可通过实验室人员的终端进行提醒。新证据表明，玻璃化冷冻是冷冻保存精液的一种有价值的方法。该方法的原理是将小体积样本与无污染液氮直接接触并快速冷冻，可以防止冰晶的形成，并减少精子的渗透性损伤。在麦管玻璃化冷冻(无菌玻璃化冷冻)中，也可以使用封闭系统，不需要无菌的液氮。所有操作人员都应接受规范的CASA分析仪使用培训，严格按照使用指南进行操作‌。

精液显微镜检查精子计数：正常人精子计数为0．6×1012～1．5×0.012/L，相当于一次排出的精子总数为400×106～600×106。当精子计数值＜20×106/ml或一次排精总数＜100×106为精子减少，超过致孕极限而导致不育。精液直接涂片或离心沉淀后均未查到精子为无精症。见于先天性睾丸发育不全、畸形或后天睾丸损伤和萎缩(如睾丸结核、炎症、淋病、垂体或肾上腺功能异常的内分泌性疾病等)、输精管阻塞或是先天性输精管及精囊缺陷，是导致少精或无精的重要原因，也是导致不育的重要原因。检查有无精子也是检查输精管结扎术的效果观察。结扎六周后，连续检查无精子，说明手术成功，如果结扎两个月后，精液中仍有精子，说明手术不成功。Hamilton Thorne精子分析仪具有良好的数据管理和报告生成功能，能够方便用户查阅和分享分析结果。南京兔子精子分析频闪光源

HAMILTON THORNE精子分析仪可分析参数，鞭打频率（BCF）‌：精子曲线路径跨越其平均路径的平均频率。美国浓度精子分析W.H.O 6

CASA系统在男性生殖能力检验应用中的功能要求和参数设置CASA是将现代化的计算机技术和先进的图象处理技术应用于精子质量的临床检验，通过对精子动（静）态图象中精子特性的***分析，为临床提供有关精子质量各项指标的准确数据。CASA系统一般包括硬件和计算机软件支持系统几个部分：（1）相差显微镜、恒温装置和**技术板（Makler板、Macro板或MicroCell计数池等）；（2）高速、高分辨率的摄像机和电视监视器组成的摄像系统；（3）计算机分析处理系统及打印机打印输出。美国浓度精子分析W.H.O 6