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数字ELISA易用性

来源: 发布时间:2024年12月30日

芯弃疾JX-8B数字ELISA产品

每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测

单分子酶检测到的比较低酶分子数假设蛋白质检测分析的更终灵敏度为背景信号可能由非特异性相互作用产生。为了评估内在敏感性,我们通过将400,000个带有生物素的珠子与不同浓度的酶缀合物链霉亲和素-阝-半乳糖苷酶(S阝G)混合,创建了具有明确酶与珠子比例的珠子群体。为了方便起见,生物素化珠子是通过将生物素化DNA与功能化的珠子杂交提供的。互补DNA。[我们注意到,该实验不应被视为敏感的DNA检测;该检测的敏感性受到非特异性相互作用的限制,如补充图2所示,这些相互作用发生在酶缀合物和表面结合的DNA之间。 芯弃疾JX-8B单分子普惠化ELISA检测产品,超敏检测,低至可测试到亚皮克级;数字ELISA易用性

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芯弃疾JX-8B数字ELISA产品是什么?怎么做到单分子技术的低成本实现?参考原理:

分子水平的疾病检测正在推动早期诊断和治病的新兴变革。该领域面临的一个挑战是,用于早期诊断的蛋白质生物标志物可能存在于非常低的丰度中。传统免疫分析技术的检测下限为飞摩尔范围(10−13M)。数字免疫分析技术将检测灵敏度提高了三个数量级,达到了飞摩尔范围(10−16M)。这一能力有可能在诊断和治病领域开辟新的进展,但这些技术已被限制为不适合高效常规使用的手动程序。我们描述了一种新的实验室仪器,该仪器能够完全自动化单分子阵列(Simoa)技术进行数字免疫分析。该仪器具有单分子灵敏度和多重检测,具有快速周转时间和每小时处理66个样本的能力。针对心血管、肿标、传染病、神经学和炎症研究中的16种感兴趣的蛋白质,开发了单分子和多重数字免疫分析方法。与传统方法相比,Simoa免疫分析方法的平均灵敏度提高了lELISAwas>1200倍,变异系数为<10%。数字免疫分析在推进人类诊断方面具有潜力,这在两个临床领域得到了体现:创伤性脑损伤和传染病的早期检测 单分子技术数字ELISA灵活芯弃疾JX-8B单分子普惠化ELISA检测产品,人人都用能得起的单分子检测;

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芯弃疾JX-8B数字ELISA高敏检测产品,使用现有平台就能做的单分子免疫检测;

参考的其他高灵敏检测方法:

两种更多测试的模拟分析信号放大技术是免疫PCR和生物条形码分析。免疫PCR通过将检测抗体标记为DNA分子,然后使用PCR进行扩增和定量,从而提高灵敏度。生物条形码分析利用了与DNA“条形码”标记的抗分析物纳米颗粒,这些纳米颗粒在与捕获在金微粒上的分析物结合后,从纳米颗粒上脱杂以进行定量。这两种方法相对于传统免疫分析法的灵敏度提高了10到100倍,但尚未整合到所需的全自动系统中,也未用于多重分析。为了比较大限度地加速药物发现、验证新型生物标志物并将分子水平诊断引入临床主流,需要一种具有高效率、高质量数据和成本效益的稳健、多重超灵敏蛋白质检测技术。

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数字ELISA测量蛋白质浓度远低于传统ELISA的能力源于两种效应:1)SiMoA对酶标记的高度敏感性;以及2)通过数字化蛋白质检测可以实现的低背景信号。任何免疫测定的灵敏度由其灵敏度决定。检测技术到标签,抗体亲和力,试验背景,以及背景测量值的变异(%CV)27.SiMoA对酶非常敏感标签(图2)为在数字ELISA中检测亚飞摩尔浓度的标记蛋白提供了基础。也就是说,对于给定亲和力的抗体,其灵敏度为免疫测定将由测定背景决定,SiMoA的高标记灵敏度有助于降低这种背景。对照实验表明,数字ELISA的背景来自于检测抗体和酶的非特异性结合(NSB)与捕获珠表面结合(补充表2)。AsSiMoA相比传统检测方法具有更高的标记灵敏度,明显减少了检测抗体(~1nM)和酶标记物(1–50pM)的需要,以检测结合事件,与传统方法相比(标记试剂浓度~10nM)。降低的标记物浓度减少了NSB到捕获表面,从而导致背景信号明显降低。 芯弃疾JX-8B单分子ELISA检测产品,少至可以进行8孔、4孔的灵活检测。

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芯弃疾JX-8B数字ELISA高敏检测产品;具有以下特点:多重、超敏微量、极速灵活、开放; 
只有少量分泌蛋白可测量的可能性突显了蛋白质测量领域面临的挑战:医学上相关的生物标志物可能存在于非常低的丰度中。免疫测定仍然是是蛋白质生物标志物敏感和特异性测量的基础。然而,传统的免疫分析技术在检测不可测量的生物标志物时灵敏度不足,这些生物标志物肯定位于当前可检测范围之下。主流的传统免疫分析方法——包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光和电化学发光——的灵敏度下限约为10^-13M(~<0.1pM)。许多降低灵敏度的方法已被描述,包括拉曼增强信号检测、电感耦合等离子体质谱,但这些方法的数据表明其成功有限。非常规方法如亚飞摩尔级检测具有明显的权衡,例如程序较长或无法提供定量答案。
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为了证明检测极低浓度的可能诊断价值使用数字ELISA检测血液中的蛋白质,对接受治理性前列腺切除术(RP)的患者血清样本中的PSA进行了测量。PSA是前列腺病的血清生物标志物病症既用作筛查工具,也用于监测住院患者的复发接受治理性前列腺切除术28。治理性前列腺切除术后,绝大多数PSA被消除,水平低于标准商用检测方法的检测限(3pM或0.1ng/mL)。定期监测这些患者的PSA恢复情况可以检测前列腺病的复发,但术后几年内生化复发可能不会被发现。 数字ELISA易用性