斑马鱼敲除品系成功案例1、基因分析分析目的基因的保守结构域;2、靶点筛选设计4个gRNA靶点,PCR检测包含靶点的区域真实序列,显微注射验证靶点效率;3、大规模注射养殖F0Cas9pro+gRNA共注射,共养殖F0约80条用于后期Founder筛选;4、Founder筛选F0代斑马鱼与野生型外交,收集48hpf的F1胚胎抽取基因组,PCR鉴定,测序结果在靶点位置出现双峰的认为产生突变,然后TAclone验证其可能产生的突变方式;5、F1代筛选F1代斑马鱼剪尾筛选,TAclone验证突变方式:斑马鱼实验找杭州环特生物。斑马鱼验证实验一般多长时间
报告基因选用GFP或RFP,**小启动子来自斑马鱼gata2基因;将上述载体与体外转录得到的Tol2转座酶的mRNA共同注射到斑马鱼的单细胞受精卵中,受精卵长大后成为founder;Founder外交(out-cross)得到F1代胚胎,从中挑选出对于报告基因具有组织特异性表达模式的胚胎,拍照记录后分类培养;F1长大后通过linker-mediatedPCR的方法鉴定对应于GFP(或RFP)表达图式的Tol2插入位点,并通过与已知基因组数据比较,对插入位点进行定位与分析;通过外交纯化得到转基因鱼,直至得到只含有单个插入品系的转基因鱼。环特公司官网斑马鱼实验技术标准是什么。
1、斑马鱼可应用于发育生物学的细胞谱系分析、突变鉴别、饱和诱变分析、基因转移研究、基因连锁图的构建,其体外受精、胚体透明、细胞分裂快等特点使它比起大小鼠有独特优势。2、基因功能研究:斑马鱼繁殖速度快,能提供足够量的胚胎用于基因筛选;其胚体透明的特点可以一目了然地观察到基因突变后的表型变化。3、疾病发病机制研究:斑马鱼的发生、疾病生理、基因组与人类相似度较大,主要信号通路和基因具高度同源性,诸多斑马鱼疾病(如血、免疫性系统疾病、疾病等)模型已建立,利用斑马鱼的疾病模型来研究人类相关疾病是近年全球热点的科研项目。
应用视网膜修复斑马鱼因为它具有自我修复破损视网膜的独特能力。人类视网膜中也拥有类似斑马鱼能够修复视网膜的细胞,并计划在5年内将研究结果用于失明患者***,让他们重见光明,这可能有助于***因视网膜受损引起的失明。听觉修复放大2.1万倍的耳蜗毛细胞华盛顿大学西雅图一直在对斑马鱼进行研究,试图解决人类听力丧失的问题。和许多其他水生生物一样,斑马鱼在身体表面长有毛细胞。这些毛细胞的作用是探测水中的振动,其原理与人类内耳中的毛细胞相似。但是,与人类不同的是,斑马鱼的毛细胞在受损后还可以再生。研究人员希望他们的工作可以揭开谜底,保护人类的毛细胞免受损伤、并推动毛细胞的再生。另一组研究试图了解导致斑马鱼、鸟类和老鼠的毛***的基因和其他分子。有一项研究发现了一种似乎可以让动物毛***的发育蛋白。在研究中一名团队成员发现了小鸡的毛细胞受损后体内一种蛋白质的含量(小鸡的毛细胞可以再生)有所上升。参与这些实验的科学家们说使用药物防止听力丧失的临床实验有可能会在十年内实现。但是找到利用毛******听力丧失的办法可能还需要至少20年的时间。斑马鱼的遗传学研究实验。
以下是多孔板实验的具体进程:1、准备实验设备和资料多孔板实验需求一个容器、一个多孔板、一些食物和一些斑马鱼幼鱼。容器应足够大,以包容多个斑马鱼幼鱼,但不要太大,以免影响幼鱼的行为。多孔板应该适合幼鱼的大小,而且可以放置在容器中。食物可以是小颗粒状的鱼食或其他恰当大小的食物。2、练习斑马鱼幼鱼在开端实验之前,需求练习斑马鱼幼鱼,以确保它们知道怎样通过多孔板来获得食物。为此,可以先将幼鱼放置在一个没有孔的板上,让它们学会在板上找到食物。之后,可以逐步增加孔的数量和大小,以练习幼鱼学会通过多孔板获取食物奖赏。3、开始试验:一旦幼鱼学会了如何经过多孔板获取食物奖赏,就能够开始正式的试验了。首先,将多孔板放置在容器的一端,并将食物放在多孔板的对面。然后将幼鱼放置在容器的另一端。幼鱼会测验经过多孔板来获得食物奖赏。如果幼鱼成功经过多孔板到达食物,则它们将获得食物奖赏。斑马鱼试验步骤有哪些?环特智鱼优检
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斑马鱼CRISPR基因编辑技术服务,含基因敲入品系制备、基因敲入品系制备、转基因品系制备等。斑马鱼基因敲入品系制备服务简介:1.基因敲入(Knockin)非同源依赖的DNA修复技术,在斑马鱼基因组定点插入外源DNA(荧光蛋白、PA等)。2.基因敲入技术特点2.1定点插入;2.2敲入效率较低。服务流程:根据客户基因敲入要求进行基因分析;cas9mRNA和多个gRNA靶点的设计及合成;高效gRNA靶点的筛选及效率验证;敲入载体设计及构建;斑马鱼胚胎的显微注射和敲入验证;F0代斑马鱼的可遗传性筛选;杂合子F1代斑马鱼的基因型鉴定。环特生物优势:国际前列的斑马鱼敲入技术以及上百例的成功经验;特有的高效筛选方法。斑马鱼验证实验一般多长时间
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