把培养瓶置于倒置显微镜下观察，如大部分细胞变圆，立即移除胰酶消化液（如大部分细胞漂起，可不移除胰酶消化液），加入5ml预热完全培养基，用吸管取培养液吹打瓶壁细胞，使其脱离瓶壁形成单细胞悬液，离心，小心移除上清；3、加入5ml预热完全培养基，吹打重悬细胞用细胞计数板在显微镜下计算细胞数，分装入T25培养瓶中，添加基至总体积为5ml，置于37℃、5%CO2培养箱中培养；传代1次。注意事项1.熟知所养细胞的生长密度极限；2.进行所养细胞传代时，消化时必须把培养瓶置于倒置显微镜下观察，并记录所需时间，下次按照该时间执行即可；3.进行细胞传代时必须结合考虑细胞生长密度需求（启动正常生长所需的密度...

的鉴定指标，如人脐静脉内皮细胞HUVECs，如分子指标为vWF和CD34阳性以及αSMA和CD45阴性，功能指标包括血管形成能力、内吞能力等，我司都具有检测能力。其他类型细胞比如平滑肌细胞一般为α-SMA阳性、Vimentin阴性，成纤维细胞则与之相反。因此我司可以为每个细胞进行相应的费用优惠的检测服务，比如细胞的一阴一阳只需要1500元，并无需客户提供抗体。2、由于原代细胞的多样性，我司所提供的原代细胞种类并不局限于上表，我们可以根据客户的需求进行原代细胞的定制服务。3、鉴于我司长期致力于构建原代细胞库，我司具有各种特定原代细胞的优化的分离体系与培养体系，因此可以提供各种原代细胞相应...

细胞鉴定服务细胞鉴定服务（DH0007）一、服务介绍为了后续实验成功进行，我们对分离培养的细胞做一个细胞鉴定实验。细胞鉴定实验包括形态学鉴定、免疫组织细胞化学鉴定（免疫荧光化学鉴定）、流式细胞仪鉴定二、服务内容及价格服务编号服务内容服务价格服务周期（工作日）DH0007-1免疫组织细胞化学鉴定（免疫荧光化学鉴定）100元/片/指标7-10DH0007-2流式细胞仪鉴定200元/样本7-10三、客户提供1.客户需提供生长状态良好的细胞株及其他用于实验材料，如药物、质粒、病毒、相关抗体等；（若客户需要采购其它检测试剂盒需提前告知）2.提供的生物材料中携带荧光，请务必告知3.实验前，客户需告...

原理过表达稳定细胞系（OverexpressionStableCellLines）的构建利用慢病毒转染、电转等技术手段将特定的基因序列整合到宿主细胞的染色体上，使得目的基因能够在宿主细胞内长期且稳定的表达。用途基因功能研究、免疫/杀伤/增殖等、抗体药物的活性筛选（细胞水平的结合和阻断）、CAR分子的杀伤活性评价。材料与仪器（以慢病毒pMSCV载体为例）包含目的基因和eGFP-Tag的pMSCV质粒、带有eGFP-Tag的pMSCV空载质粒、GAG质粒、VSV质粒、Puromycin、Polybrene、Lipo3000、HEK293T细胞、opti-MEM、DMEM、FBS、双抗、μm...

病毒包装技术服务病毒包装技术服务（DH0010）一、服务介绍重组病毒以其高效和多样性，是非常有效的将外源基因导入细胞的方法。慢病毒腺病毒腺病毒相关表达特点稳定表达瞬时表达瞬时表达是否整合到基因组是否否免疫原性弱强弱病毒**力高很高高注：高浓度时可能有极少量整合发生。二、服务内容及价格服务编号服务内容服务价格服务周期（工作日）DH0010-1慢病毒包装咨询咨询DH0010-2腺病毒包装咨询咨询DH0010-3腺相关病毒包装咨询咨询注：根据客户实验需要灵活定制病毒载体包装服务，满足客户研究的多种需要。三、客户提供1.客户需提供生长状态良好的细胞株及其他**（处理细胞**）实验材料（默认由我...

2）病毒更换不含双抗的新鲜培养基2mL，从冰箱取出并在37℃水浴中快速融化病毒并根据MOI计算所需病毒液体积加入六孔板中（一般实验操作采用粗病毒液半体积），每孔加入终浓度为8µg/mlpolybrene；（3）24h后更换不含双抗的新鲜培养基2mL；（4）48h后观察荧光。（代谢比较缓慢的细胞GFP表达所需时间较长，72h可以观察到荧光）注意：后期请根据细胞生长的情况对细胞进行及时换液和传代，以保证细胞良好的生长状态①Polybrene（聚凝胺）:是带正电的小分子，与细胞表面的阴离子结合，提高慢病毒对细胞的效率，通常加入polybrene能提高效率2～10倍。Polybrene有一定的...

5）转染6-8h后更换7ml不含双抗的新鲜培养基（DMEM+10%FBS）。（此时弃去的培养基中已含有少量的病毒，废液以及所用的移液枪头必须经处理后才能丢弃）（6）换液后48h，用移液枪从培养皿的一侧收集上清液到15mL离心管，3000r/min离心5min并用，过滤后的细胞上清液如果暂时不进行进一步处理，可分装后置于-80℃冰箱保存。注意：通常细胞转染24h后就可以看到荧光蛋白的表达，293T细胞会明显的皱缩成圆形，48h可以进行荧光照片的采集，判断转染效率。一般为了能获得高滴度的病毒，需要通过不断优化条件，提高转染效率。优化条件包括：细胞培养条件，转染试剂的优化，三质粒比例的优化（...

所获得的扩增子每个末端都含有部分已知DNA序列。随后，对这些扩增子进行测序，检测上述已知序列的相邻区域。10、数字PCR数字PCR（DigitalPCR，dPCR）是一种核酸分子定量技术。当前核酸分子的定量有三种方法，光度法基于核酸分子的吸光度来定量；实时荧光定量PCR（RealTimePCR）基于Ct值，Ct值就是指可以检测到荧光值对应的循环数；数字PCR是的定量技术，基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量，是一种定量的方法。主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法，将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PC...

干细胞诱导分化技术服务干细胞诱导分化技术服务（DH0008）一、服务介绍自我更新能力和多向分化能力是干细胞的两个基本特征。干细胞的诱导分化一方面是干细胞鉴定的主要方法，另一方面也是干细胞功能学研究的主要途径。依赖于成熟的干细胞技术平台，上海东寰生物可以开展多种干细胞分化潜能研究的实验服务二、服务内容及价格服务编号服务内容服务价格服务周期（工作日）DH0008-1诱导成骨分化咨询咨询DH0008-2诱导成脂分化咨询咨询DH0008-3诱导成软骨分化咨询咨询三、客户提供1.客户需提供生长状态良好的细胞株及其他专门（处理细胞）实验材料；（若客户需要采购其它检测试剂盒需提前告知）2.实验前，客...

建立疾病模型的目的是为了防治人类疾病。因此，疾病模型研究结果的可靠程度取决于模型与人类疾病的相似或可比拟的程度。接下来就让上海东寰带您了解相关知识一个好的疾病模型应具有以下特点：①能够再现所要研究的人类疾病，动物疾病表现应该与人类疾病相似；②动物能重复产生该疾病，尽可能能在两种动物体内复制该病；③动物背景资料完整，实验动物合格，生命周期要满足实验需要；④动物要价廉、来源充足、便于运送；⑤尽可能选用小动物。生物医学科研专业设计中常要考虑如何建立动物模型的问题，因为很多阐明疾病及疗效机制的实验不可能或不应该在患者身上进行。常要依赖于复制动物模型，但一定要进行周密设计，设计时要遵循下列一些原...

流水线作业，这样能节省时间，并且能保证样品的质量。如果请人，每个人需要负责哪一板块的工作，比如谁负责麻醉，谁负责取血液，谁负责取，谁负责拍照、谁负责储存，都需要提前规划交代清楚。实验指标检测如果是需要自己做的检测，比如常见的WesternBlot、PCR，建议提前可以看看教程（无论是视频还是贴吧，都要自己多方参考）。有了一定的理论基础后，再向老师、师兄师姐学习经验和技术，如果实验平台的仪器需要提前预约，建议提前规划好使用的时间。反复总结寻找答案在整个预实验的过程中可能会出现很多问题。比如造模效果欠佳、灌胃操作不当、腹腔注射操作失误、物使用不当等引起动物死亡。每遇到问题都需要自己想办法解...

具体选用何种培养器皿取决于细胞生长密度需求（启动正常生长所需的密度）。二.细胞换液培养1、全量换液：把所有的旧培养液移除，加入新的培养液（加入培养基的量根据细胞的密度和生长速度）；2、半量换液：把旧培养液移至15ml离心管中，然后在培养器皿中加入适量新培养基（避免细胞离开培养液太久），把装有旧培养液的离心管进行离心（1000RPM,10min），离心后取适量旧培养上清至培养器皿中。注意事项1.全量换液适合于生长较快的肿瘤细胞，因为这些细胞可在短期内分泌足够的因子来支撑其生长；2.半量换液主要适合于生长较慢的原代细胞和干细胞，这些细胞很难在短期内分泌足够的因子来支撑其生长，旧培养液中恰好...

这些就需要根据各自的特殊项目而制定针对性的培养条件了。下面我们以实验室常见的DMEM和1640为例，来介绍它们之间的不同之处。DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium)是一种广泛应用的细胞培养基之一，它是由Eagle于1959年开发出来的，后由Dulbecco进行了改良。DMEM主要适用于肝脏、肾脏、肺、心脏等多种类型的哺乳动物细胞系的培养。DMEM中含有较高浓度的葡萄糖（4500mg/L）、氨基酸、维生素和微量元素等营养物质。此外，DMEM还添加了酸和乳酸等缓冲剂，能够保持细胞在较宽的pH范围内正常生长。RPMI-1640(RoswellParkMem...

荧光试剂请避光保存。反应缓冲液10X1ml催化剂溶液25x400ulTAMRA红色荧光溶液400x25ul缓冲添加剂粉末200mgHoechstX20ul使用前须知该产品是采用成像检测方法对贴壁细胞进行检测，适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜等仪器。非贴壁细胞可在孵育EdU后进行细胞涂片处理，固定后再采用贴壁细胞的染色流程进行检测。也可以应用于流式细胞仪检测。实验步骤(以24孔板，HK2贴壁细胞为例)EdU标记(a)将细胞完全培养基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU标记培养基；(b)提前将2xEdU标记培养基预热，然后等体积加入到细胞原有培养基中，获得lxEdU溶液，其中...

免疫系统，人体的免疫系统由免疫细胞、免疫分子构成，又细分为中枢和外周皮肤和黏膜、肝、肠道、肺等区域免疫部位，以及吞噬细胞、淋巴细胞、抗体、补体、细胞因子等。那么，蛋白质与免疫系统或者免疫两者之间有什么关系？上海东寰与您分享。我们先来认识一下蛋白质，蛋白质是机体细胞、组织和身体部位的重要组成成分，是一切生命的物质基础，一切生命的表现形式，本质上都是蛋白质功能的体现，没有蛋白质就没有生命。蛋白质的功能，首先就是人体组织的构成成分，人体的任何组织和身体部位都以蛋白质作为重要的组成成分，其中就包括了我们前面提到的免疫身体部位，所以人体在生长过程中就包含着蛋白质的不断增加。就好像盖房子需要砖瓦一...

一.细胞复苏1、提前准备完全培养基并预热至37℃（可以放至在水浴或培养箱中进行预热，需要多少预热多少，反复预热会导致培养基失活）；用清洗洁净的烧杯或其他合适容器装有适量超纯水，然后放入37-38℃水浴锅中预热至37℃（至少需30min）；把所需耗材和其他物品放置于超净工作台中紫外照射灭菌；2、提前查询所取冻存管的存放位置，把整个存储架子提起，为了降低复温对其它细胞的影响，可把该存储架子放置于装有液氮的泡沫盒中，快速（存储架离开液氮罐的时间不要超过1分钟，否则其余细胞容易复温死亡，冻存管子的液氮会气化）从液氮罐中取出冻存管并放置于装有液氮的保温杯中(必须用用洁净镊子取出冻存管，以免手)，...

建立疾病模型的目的是为了防治人类疾病。因此，疾病模型研究结果的可靠程度取决于模型与人类疾病的相似或可比拟的程度。接下来就让上海东寰带您了解相关知识一个好的疾病模型应具有以下特点：①能够再现所要研究的人类疾病，动物疾病表现应该与人类疾病相似；②动物能重复产生该疾病，尽可能能在两种动物体内复制该病；③动物背景资料完整，实验动物合格，生命周期要满足实验需要；④动物要价廉、来源充足、便于运送；⑤尽可能选用小动物。生物医学科研专业设计中常要考虑如何建立动物模型的问题，因为很多阐明疾病及疗效机制的实验不可能或不应该在患者身上进行。常要依赖于复制动物模型，但一定要进行周密设计，设计时要遵循下列一些原...

液体活检三大标志物之一的外泌体（exosomes），近几年研究热度持续攀升。有关外泌体载药、诊断、免疫疗法等方向的文章陆续发表在Science、Nature等各大期刊上，外泌体已成为生命科学/基础医学研究的一大热点。外泌体的功能外泌体可能作为细胞之间物质和信号通讯的途径，不同的细胞通过分泌携带不同组分的外泌体实现细胞间通讯，这些外泌体被受体细胞吸收，通过物质交换或释放内含物实现物质和信号的交流。外泌体与受体细胞的信息交流可能通过以下4种途径实现:外泌体表面膜蛋白质被目的细胞表面的受体识别，从而靶细胞;外泌体在蛋白酶作用下产生的表面膜蛋白质碎片可作为目的细胞表面受体的配体;外泌体脂膜可以...

使每条染色体的着丝点排列在细胞中间的一个平面上。这个平面与纺锤体的中轴相垂直，类似于地球上赤道的位置，所以叫做赤道板。分裂中期的细胞，染色体的形态比较固定，数目比较清晰，便于观察清楚。后期细胞分裂的后期，每一个着丝点分裂成两个，原来连接在同一个着丝点上的两条姐妹染色单体也随着分离开来，成为两条子染色体。纺锤丝牵引着子染色体分别向细胞的两极，使细胞的两极各有一套染色体。这两套染色体的形态和数目是完全相同的，每一套染色体与分裂以前的亲代细胞中的染色体的形态和数目是相同的。末期当这两套染色体别到达细胞的两极以后，每条染色体的形态发生变化，又逐渐变成细长而盘曲的丝。同时，纺锤丝逐渐消失，出现新...

血管生成实验血管生成实验（DH0011）一、服务介绍应用Matrigel模拟机体环境，上面接种**细胞，观察血管生成情况。二、服务内容及价格服务编号服务内容服务价格服务周期（工作日）DH0011-1血管生成咨询咨询三、客户提供1.客户需提供生长状态良好的细胞株及相关处理药物2.实验前，客户需告知具体的细胞处理方式及详细要求。注：若有特殊处理的样品，请尽可能出示相关材料（具有保密性的材料除外）。四、服务流程1：细胞培养2：细胞转染或药物处理3：铺Matrigel胶4：接种细胞5：观察血管生成情况五、提交给客户结果1、完整实验报告2、细胞培养图片3、血管生成图片六、服务项目说明1.实验周期...

随着现代医学的不断发展，深入探讨和研究人类各种疾病的发病机制及康复机制，单纯以人本身作为实验对象是困难的，而且时间和空间上也存在着局限性，而动物模型克服了这些缺点和不足，可以作为实验设计和临床设计的试验基础。动物疾病模型主要用于实验生理学、实验病理学和实验学（包括新药筛选）研究。有以下三种不同的分类方式。按产生原因分类：自发性动物模型，是指实验动物未经任何有意识的人工处置，在自然情况下所发生的疾病。包括突变系的遗传疾病和近交系的疾病模型。诱发性或实验性动物模型，实验性动物模型是指研究者通过使用物理的、化学的和生物的致病因素作用于动物，造成动物组织或全身一定的损害，出现某些类似人类疾病时...

无缝克隆的原理：在载体末端和引物末端应具有15-25个同源碱基（同源臂）。通过T5核酸外切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶，三种酶同时发挥功能，从而达到单片段或多片段与载体连接的技术。T5核酸外切酶：5‘→3’端消化DNA片段，形成粘性末端；DNA聚合酶：填补缺口；DNA连接酶：两条DNA单链黏合起来。无缝克隆的特点传统分子克隆无缝克隆传统分子克隆和无缝克隆对比：单次插入片段：传统分子克隆一轮只能插入一个片段；无缝克隆单个至多个（≤5）。受限于酶切位点：传统分子克隆是；无缝克隆不是。引入多余序列：传统分子克隆是；无缝克隆不是。流程&操作时间：传统分子克隆流程繁琐，时间长。无缝克隆流程简单...

1、取细胞县液100u加入Transwel小室。2、24孔板下室一般加入600u含20S的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱其至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。3、培养细胞:常规培养12-48h(主要依细胞侵袭能力而定)。24h较常见，时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。直接计数法贴壁”细胞计数，这里所谓的“贴“是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去，通讨给细胞染色可在镜下计数细胞。取出Transwel小室...

基因克隆及载体构建服务基因克隆及载体构建服务（DH1001）一.服务内容1、引物设计：客户提供目的基因及相关材料（具有保密性的材料除外）2、质粒制备：由客户提供或由我公司代为购买。3、克隆载体：由客户提供或由我公司代为购买。4、基因亚克隆：1)DNA定向克隆到新的载体，准确度高。2)可完成5kb以上DNA长片段的克隆.3)较个工作日即可完成二.样品要求1、客户需提供克隆基因信息及经测序验证的质粒模板>5ul（）2、客户需提供克隆载体2ug/个。3、非常用的限制性内切酶5ul/个注：若有特殊处理的样品，请尽可能出示相关材料（具有保密性的材料除外）。三.收费标准服务编号服务内容服务价格服务...

细胞转染技术服务细胞转染实验技术服务（DH0002）一、服务介绍细胞转染（Transfection）是指将DNA或者RNA导入真核细胞中的过程。转染的目的是产生重组蛋白，或特异性增强或控制转染细胞中的基因表达。常规转染技术可以分为两大类，一类为瞬时转染，一类为稳定转染（构建稳定细胞株）。二、服务内容及价格服务编号服务内容服务价格服务周期（工作日）DH0002-1瞬时转染询价7-10DH0002-2稳定转染（构建稳定细胞株）询价7-10注：瞬时转染：是指外源基因进入受体细胞后，存在于游离的载体上，不整合到细胞的染色体上，在外源基因导入细胞1-4天后收获细胞对目的基因的表达进行检测。特点是...

7天左右）根据包装的慢病毒载体上的筛选，进行加压筛选，这里以嘌呤霉素为例（1）每2-3天换含puromycin的完全培养液一次，至不筛选对照组细胞被puromycin杀光。westernblot或者qPCR检测目的蛋白的表达效率。（2）可进行以下两步操作（依照具体实验需要选择）①不挑取单克隆：将并筛选后的细胞进行传代，并继续施加低浓度puromycin进行维持性筛选培养。连续筛选并传3代后，冻存稳定细胞株。②挑取单克隆：制备细胞悬液，用培养基稀释细胞到1个/10µl，接种到96孔板中，会有一部分孔中只有单个细胞，对其扩大培养，westernblot或者QPCR检测目的蛋白的表达效率。注...

客户需告知具体的细胞处理方式及详细要求。注：若有特殊处理的样品，请尽可能出示相关材料（具有保密性的材料除外）。四、服务流程瞬转稳转导入的DNA没有整合到基因组中，而是保留在细胞核上导入的DNA整合到基因组中导入的遗传物质不传递到子代；遗传改变只是暂时的导入的遗传物质能够代代相传；遗传改变是**的不需要选择性筛选需要选择性筛选出稳定转染的细胞DNA载体和RNA都可用于瞬时转染只有DNA载体可用于稳定转染；RNA本身不能稳定地导入细胞中导入的遗传物质的高拷贝数导致高水平的蛋白质表达。单拷贝数或低拷贝数的稳定整合的DNA导致较低水平的蛋白质表达。通常在转染后24-96小时内收获细胞。需要2-...

大到动物死亡原因分析，小到灌胃操作耗时多长时间。建议反复总结出每天实验的优缺点。做任何一个操作之前，建议提前脑海中反复模拟，准备好相关工具和试剂，避免临用之际缺少药的，影响实验操作节奏和个人心情。笔者曾经灌胃操作的时候发现药物竟然忘带了，只好重新回实验室准备，那真叫一个郁闷。仔细记录每日实验过程无论是硕士还是博士，导师给我们上的堂课往往就是交代我们要详细记好实验记录，只要是和实验相关的，无论是照片，还是文字，必须要及时事无巨细地详细记录。并且要备份好每一份实验记录。我个人一般喜欢每天及时地记在「科研实验记录本」上面，然后拍照扫描成电子版储存在电脑和云端。时间规划首先，个人是不赞同每天2...

细胞内吞检测细胞内吞检测服务（DH0013）一、服务介绍1)无菌条件下，将DiI-LDL用细胞培养基稀释至25-50µg/ml。2)加入活细胞内，37℃培养4-5小时。3)孵育结束，吸去含有HumanDiI-LDL的培养基，并用无探针的培养基洗几次。4)细胞固定5)荧光显微镜拍照二、服务内容及价格服务编号服务内容服务价格服务周期（工作日）DH0013细胞内吞检测服务（DIL-Ac-LDL）咨询咨询三、客户提供1.符合实验要求的细胞药品（包括说明书）（可代为购买）,若无任何说明，默认由本公司提供。四、提交给客户结果1、完整实验报告一份，包括实验流程、数据和图片等2、结果分析报告五、服务项...

使每条染色体的着丝点排列在细胞中间的一个平面上。这个平面与纺锤体的中轴相垂直，类似于地球上赤道的位置，所以叫做赤道板。分裂中期的细胞，染色体的形态比较固定，数目比较清晰，便于观察清楚。后期细胞分裂的后期，每一个着丝点分裂成两个，原来连接在同一个着丝点上的两条姐妹染色单体也随着分离开来，成为两条子染色体。纺锤丝牵引着子染色体分别向细胞的两极，使细胞的两极各有一套染色体。这两套染色体的形态和数目是完全相同的，每一套染色体与分裂以前的亲代细胞中的染色体的形态和数目是相同的。末期当这两套染色体别到达细胞的两极以后，每条染色体的形态发生变化，又逐渐变成细长而盘曲的丝。同时，纺锤丝逐渐消失，出现新...