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八方同创提醒猪场，PCR循环数不能一直增加到50个循环的，原因如下：应按照试剂盒说明书进行操作。1、成熟的合格的PCR试剂盒，其循环数是生产商在开发阶段经过反复实验验证确认的，没必要也没有理由增减其循环数，甚至可能会造成检测失灵。2、在一定范围内增加循环数，可以一定程度的提高产物量，但若将循环数增加过多将导致反应时间过长，有一些非特异产物的扩增也会相应增加，而且随着反应的进行酶的扩增能力下降，合成目标片段的能力会随之下降，可能引起其他的非特异扩增；dNTP等原料也会逐步消耗掉，如果有某一种dNTP消耗比较大，后续扩增就难免会引起错配。因此不要过度延长PCR循环次数。八方同创提醒猪场非洲猪瘟弱毒株阳性场猪只间歇性排毒明显，排毒量小，母猪群体环境不易检出。猪蓝耳病病毒PCR诊断试剂厂家价格

非洲猪瘟病毒（ASFV）颗粒在无血清培养基中于pH4–10范围内保持稳定，但当环境pH低于4或高于11.5时，可在数分钟内迅速失活。值得注意的是，在含血清条件下病毒稳定性增强：5°C保存时，血清中的病毒可维持活性性长达6年；即使在含25%血清的培养基中处于pH13.4的强碱性环境，仍可保持数天活性。病毒灭活可通过热处理实现（60°C持续30分钟，或56°C持续70分钟）。多种有机溶剂可通过破坏病毒脂质包膜使其失活，但该病毒对蛋白酶及核酸酶表现出较强抗性。八方同创建议：开展ELISA检测前应对样品进行规范灭活；病原学检测完成后，亦需对剩余样品实施灭活处理，以有效降低生物安全风险，防止交叉污染。大动物疾病诊断试剂厂家价格八方同创提醒猪场，核酸检测流程接收样品、处理样品、试剂配置/核酸提取、加样、扩增、数据记录。。

八方同创提醒猪场，猪场实验室PCR 检测结果的假阳性，按以下措施处理：首先假阳性结果已确定，需排查产生假阳性的原因。1、污染。（试剂，环境，样品排查）；2、样本提取的核酸不纯，存在PCR干扰物（核酸提取样品杂质不可过多，浑浊样品提前离心后取上层液体提取）。3、PCR试剂本身的特异性（任何检测方法的敏感性和特异性都无法同时达到100%，过分追求灵敏性高导致特异性降低）

如果猪场实验室PCR 检测结果显示，阴性质控品不成立，样品频繁出现假阳性，可以判断为实验室存在污染。

实时逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）技术凭借其高灵敏度、高特异性及与高通量检测平台的良好兼容性，已成为猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）检测的**方法（Gerber et al., 2013; Harmon et al., 2012; Shin et al., 2022）。通过构建已知浓度PRRSV核酸模板的标准曲线，该技术可实现病毒载量的***定量（即基因组拷贝数测定）（Gerber et al., 2013; Harmon et al., 2012; Shin et al., 2022）。通用筛查型PRRSV RT-PCR引物通常靶向病毒基因组高度保守区域，以覆盖遗传多样性***的各类分离株（Gerber et al., 2013; Harmon et al., 2012; Shin et al., 2022）。目前多种实时RT-PCR检测体系已被建立，例如八方同创研发的猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光PCR检测试剂盒可同步鉴别PRRSV-1与PRRSV-2，但不同商业化试剂盒的诊断效能仍存在差异（Gerber et al., 2013; Harmon et al., 2012; Shin et al., 2022）。针对特定疫苗株的检测方法亦有报道（Rawal et al., 2022, 2023; Yang et al., 2017），但临床应用尚有限。八方同创建议：检测时应结合样本类型与目的，选用经验证的检测体系，并规范操作流程以保障结果可靠性。 八方同创研发生产的非洲猪瘟病毒抗原快检试剂卡方便实时 无需设备，现场实时检测。

八方同创提醒猪场实验室，实验室需要有质控品，质控品的概念和作用，质控品是指用于体外诊断的质量控制物质（定值和非定值），其目的是评价或验证测量精密度、测量准确度、由于试剂或分析仪器的变化检测系统可能产生的分析偏差等性能特征。质量控制物质可用于能力验证、实验室内质量控制。质控品是各实验室日常工作中必不可少的重要组成部分，客观真实的反映整个检测过程的可靠性、准确性。使用阳性质控品不但可检测扩增反应液的质量，还可获得检测试剂的检测的下限信息；阴性质控品主要目的是监测污染，包括实验室以前的扩增产物的污染、有实验操作所致的标本之间的交叉污染、扩增反应试剂的污染等。八方同创研发生产的非洲猪瘟病毒抗原快检试剂卡兼容性好 全病毒，缺失毒，基因Ⅰ型基因Ⅱ型均可测出。宠物疾病诊断试剂检测

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非洲猪瘟病毒检测和鉴定技术中方便的、安全的且常用的技术是PCR和红细胞吸附试验（Hemad-sorptionTest,HAT），HAT是非洲猪瘟病毒的参考标准试验。几种基于PCR的方法已被证明具有可重复性、分析特异性，并对当前流行的非洲猪瘟病毒基因型以及非红细胞吸附和低毒力病毒分离株具有高度的分析敏感性。引物组和探针靶向基因组p72区域内高度保守区域的序列。一些在实时PCR系统中使用时，为慢性动物（包括D.Kingetal.(2003)、Tignon,C.Gallardo,Iscaro,etal.(2011)和Fernandez-Pineroetal.(2013)报告的试验）的非洲猪瘟病毒检测提供了比较高的诊断敏感性。此外，越来越多的商业化试剂盒已投放市场，一些已被证明具有良好的性能，例如八方同创的非洲猪瘟病毒荧光定量PCR试剂盒（冻干微球型）。对于资源有限的国家，完全验证且易于使用的检测系统是有益的。在这种情况下，价格合理且对额外实验室耗材要求更少的商业化试剂盒是关键。猪蓝耳病病毒PCR诊断试剂厂家价格

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