pA-Tn5转座酶的高活性是其重要特性之一,这种高活性主要来源于以下几个方面:1.**转座酶突变体**:pA-Tn5转座酶是由Tn5转座酶的高活性突变体构成的。这种突变体相比野生型Tn5转座酶,在体外的转座效率显著提高,通常提升1000倍以上。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5转座酶将ProteinA与高活性Tn5转座酶融合,这种融合不仅保留了Tn5转座酶的高效DNA切割能力,还通过ProteinA的抗体结合特性,提高了对特定DNA序列的靶向能力。3.**转座随机性**:pA-Tn5转座酶能够在整个基因组上实现随机的DNA切割,这为高通量测序提供了广的覆盖度。4.**稳定性**:高活性的pA-Tn5转座酶在各种实验条件下都能保持稳定,包括在不同的温度和pH值条件下。5.**插入位点易测序**:pA-Tn5转座酶产生的DNA片段具有明确的插入位点,这些位点容易被高通量测序技术识别和分析。6.**高效片段化**:在CUT&Tag等实验中,pA-Tn5转座酶能够高效地实现目标蛋白结合DNA的片段化,为后续的测序和分析打下基础。7.**低细胞投入量**:由于其高活性,pA-Tn5转座酶允许从极少量的细胞中进行实验,如单细胞水平的研究。
pA-Tn5转座酶是通过将ProteinA与Tn5转座酶进行融合来构建的。ProteinA是一种来源于金黄色葡萄球菌的蛋白质,它具有高亲和力结合大多数哺乳动物IgG抗体的Fc片段的能力。Tn5转座酶是一种能够识别特定DNA序列并在基因组上进行“剪切-粘贴”或“复制-粘贴”的酶。融合ProteinA的目的是为了在实验中实现对特定蛋白质的靶向。下面是pA-Tn5转座酶融合的一般步骤:1.**基因克隆**:首先,将Tn5转座酶的基因和ProteinA的基因克隆到一个表达载体中。这通常涉及到分子克隆技术,如PCR扩增、限制性内切酶消化和连接酶连接。2.**融合蛋白设计**:设计一个融合蛋白,其中ProteinA的基因序列和Tn5转座酶的基因序列通过一个短的连接肽(LinkerPeptide)相连。这个连接肽通常包含几个氨基酸残基,以确保两个蛋白部分在融合后仍能保持各自的构象和功能。3.**表达载体构建**:将融合基因插入到适合的表达载体中,这个载体应该包含适当的启动子、标记基因(如抗性基因)和终止子,以确保融合蛋白在宿主细胞中得到高效表达。4.**宿主细胞表达**:将构建好的表达载体转化到宿主细胞(如大肠杆菌)中,通过诱导表达融合蛋白。Recombinant Cynomolgus Oncostatin M/OSM Protein,His Tag在目标蛋白的C末端添加His标签和Avi标签。有助于通过亲和层析进行蛋白纯化,而Avi标签则可以用于生物素。
Benzonase核酸酶是一种来自粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)的非特异性核酸内切酶,它能够高效降解所有形式的DNA和RNA,包括单链、双链、线性和环状核酸,将其消化成2至5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸。这种酶在生物技术领域有着广泛的应用,包括:1.**降低粘度**:在蛋白样品制备过程中,Benzonase核酸酶可以降低由于核酸引起的高粘度,从而便于样品处理和提高蛋白产量。2.**去除核酸污染**:在蛋白提取、疫苗生产、生物制药等领域,Benzonase核酸酶用于去除样品中的核酸污染,确保产品质量。3.**提高蛋白质分离效果**:在双向SDS-PAGE蛋白样品制备中,Benzonase核酸酶可以去除带负电荷的核酸,改善蛋白质的分离效果,增强2-DE分辨率。4.**促进蛋白质复性**:在高质量包涵体制备中,Benzonase核酸酶有助于降解核酸,从而促进不可溶性蛋白的复性。5.**稳定性和兼容性**:Benzonase核酸酶在多种条件下稳定,包括高浓度的尿素,且与蛋白酶抑制剂兼容,但需注意EDTA对其活性的抑制作用。此外,Benzonase核酸酶的活性单位定义为在30分钟内使△A260值降低1.0的酶量,相当于完全消化37μgDNA。
PCR预混合溶液是一种为聚合酶链反应(PCR)实验预先配制好的混合试剂,它包含进行PCR所需的大部分或全部成分,除了特定的DNA模板、引物和可能的水之外。这种预混合溶液的设计旨在简化实验步骤,减少实验过程中的误差,提高实验的重复性和效率。通常,PCR预混合溶液包含以下成分:-**DNA聚合酶**:负责在PCR过程中合成新的DNA链。-**dNTPs**(脱氧核苷三磷酸):是DNA合成的原料,包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP。-**缓冲体系**:提供适宜的pH和离子环境,保证DNA聚合酶的活性。-**Mg2+**:作为DNA聚合酶的辅助因子,影响酶的活性和PCR的特异性。-**稳定剂**:延长预混合溶液的有效期和稳定性。-**染料**(可选):如溴酚蓝或类似物质,用于在电泳时观察DNA条带。PCR预混合溶液的使用可以减少实验者在每次实验时手动添加各种成分的需要,从而节省时间并降低污染的风险。此外,一些预混合溶液还可能包含其他添加剂,比如增强剂或保护剂,以提高PCR的效率和稳定性。在CRISPR-Cas9等基因编辑技术中,使用Pfu DNA Polymerase进行修复模板的合成。
Lambda核酸外切酶的生产和应用涉及到多种生物技术和分子生物学技术,主要包括:1.**基因克隆(GeneCloning)**:首先将Lambda核酸外切酶的基因从噬菌体λ的基因组中克隆出来,并插入到质粒或其他载体中。2.**转化(Transformation)**:将含有Lambda核酸外切酶基因的质粒转化到宿主细胞,通常是大肠杆菌(E.coli),以便于在这些细胞中表达Lambda核酸外切酶。3.**表达系统(ExpressionSystems)**:利用原核或真核表达系统在宿主细胞中表达Lambda核酸外切酶的蛋白。4.**蛋白质纯化(ProteinPurification)**:使用各种色谱技术,如亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等,从宿主细胞的裂解物中分离和纯化Lambda核酸外切酶。5.**PerfectProtein™技术平台**:这是一种专有技术,用于生产高质量的重组蛋白,包括Lambda核酸外切酶。6.**热失活(HeatInactivation)**:在某些应用中,可能需要通过热处理来失活Lambda核酸外切酶,以终止其催化活性。7.**荧光共振能量转移(FluorescenceResonanceEnergyTransfer,FRET)**:这是一种用于实时监测酶活性和动力学的技术,可用于研究Lambda核酸外切酶降解核酸的机制。
FnCas12a的C端融合了核定位信号(NLS),有助于FnCas12a进入细胞后定位至细胞核,提高基因编辑效率。Recombinant Mouse XPNPEP2 Protein,His Tag
pA-Tn5转座酶的产品组分通常包括以下几个部分:1.**pA-Tn5转座酶蛋白**:一种高活性的Tn5转座酶突变体与ProteinA的融合蛋白,它是产品的主要组分,用于实现DNA片段化和接头连接的功能。2.**储存溶液**:碧云天的BeyoNGS™pA-Tn5转座酶产品含有特定的储存溶液,其组成为50mMHEPES(pH7.2),100mMNaCl,0.1mMEDTA,1mMDTT,0.1%TritonX-100,50%(v/v)Glycerol,这种溶液有助于保持酶的稳定性和活性。3.**测序接头(Adapters)**:用于与pA-Tn5转座酶组装形成pA-Tn5转座体(pA-Tn5Transposome),这是进行CUT&Tag实验的必需组分。4.**反应缓冲液**:部分产品包含用于转座酶反应的缓冲液,例如5×TagmentBuffer,这种缓冲液含有Mg2+,对转座酶的活性至关重要。5.**附件**:某些产品可能还包括附件,如说明书,提供产品使用和保存的详细信息。6.**其他组分**:根据产品的不同,可能还包括CouplingBuffer、AnnealingBuffer等其他辅助组分,这些组分有助于转座酶与DNA的结合和反应的进行。7.**包装规格**:pA-Tn5转座酶的包装规格可能有所不同,例如碧云天提供的BeyoNGS™pA-Tn5转座酶有800pmol和4000pmol两种包装规格。Recombinant Mouse XPNPEP2 Protein,His Tag