浦东新区大鼠疾病动物模型建模

f1代小鼠southern印记的5’探针引物如下：primersfor5’probe:5’probeforwardprimer:5’-aaacgtggagtaggcaatacccagg-3’5’probereverseprimer:5’-aaagaagggtcacctcagtctccct-3’primersfor3’probe:3’probeforwardprimer:5’-ttctgggcaggcttaaaggctaac-3’3’probereverseprimer:5’-aggagcgggagaaatggatatgaag-3’southern印记的目标片段大小如下：5’probe-bamhi:3’probe-avrii:。步骤c、采用限制性内切酶bamhi和avrii对dna进行切割；琼脂糖凝胶电泳分离dna；步骤d、将dna转到尼龙膜上；步骤e、探针变性后，与dna分子进行杂交，nbt/bcip化学显色法显色，拍照观察。southern杂交结果如图6所示，可以看到：6、8、9号pirb基因敲除小鼠如果被bamhi切割，在，wt小鼠只在，如果被avrii切割，pirb基因敲除小鼠在，wt小鼠只在。步骤6、将f1代杂合子小鼠近交获得f2代纯合子pirb基因敲入小鼠，即为本发明所述小鼠pirb基因敲入的动物模型。将本发明获得的动物模型f2代纯合子小鼠与同品系小鼠组织/细胞特异性cre表达的小鼠杂交，获得f3代小鼠，可以实现在不同组织或者细胞类型中敲入pirb基因。对f3代小鼠进行基因型的鉴定：含有无(pirb-cwt)、一个(pirb-chet)或者两个。小鼠疾病模型应用于转化医学研究中的思路与策略该研究从临床患者中筛选到潜在的致病基因。浦东新区大鼠疾病动物模型建模

    转基因小鼠对黑色素瘤发生的分子途径的理解有重要意义。此外，转基因小鼠是可靠且可重现的模型，用来评估受损基因对黑色素瘤生物学的影响。应用：基因工程小鼠模型可用于研究特定基因组改变在黑色素瘤的发生和发展的重要性及药物的靶向。1Lum－/－基因敲除小鼠Lumican是一种富含亮氨酸的小蛋白聚糖(smallleucine-richproteoglycan，SLRP)，为胶原原纤维形成的关键调节剂。黑色素瘤中Lumican表达降低与浸润相关。方法：有研究者利用BamHI建立的克隆衍生物导入胚胎干细胞，建立Lum－/－转基因小鼠。该模型可提供与发生和转移相关机制及可见变的进展，以及确定负责的黑色素瘤进展的基因。2Tyr::N-RasQ61K转基因小鼠方法：有研究者使用突变的人N-ＲasQ61K和SV40剪接以及聚腺苷酸化序列生成Tyr::N-ＲasQ61K构建体，并注射到卵母细胞中，建立Tyr::N-ＲasQ61K转基因小鼠。3BrafV600E转基因小鼠模型有研究者使用LoxP-stop-LoxP(LSL)/Cre重组酶技术从内源性Braf基因中诱导BrafV600E表达，建立BrafV600E转基因黑色素瘤小鼠模型。总结目前已有三种不同的黑色素瘤小鼠模型，但由于实验动物与人类基因组、基因调控、细胞类型、组成等方面是有一定差别。盐城品质好的疾病动物模型建模动物模型的优越性主要表现在以下几下方面！

实验期间每天进行阴道涂片，观测动情周期变化。进一步地，检测***水平是指：检测雌***(e2)、促卵泡生长素(fsh)和促黄体生成素(lh)的水平。进一步地，检测对比卵巢重量是指：比较各组大鼠双侧卵巢脏器系数。进一步地，阴道涂片是指：采用阴道脱落细胞涂片法，使用染色剂为亚甲基蓝。本发明利用顺铂成功地建立了大鼠卵巢早衰模型，为基础研究建立稳定的卵巢早衰动物模型奠定了良好的基础。本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

在一个具体实施方式中，压迫元件采用黄铜和锌的混合物制备而成。具体地情况，混合物为h62黄铜，即含铜量为％～％，余量为锌含量的黄铜。而铜、锌皆属于非铁磁性物质。在另一个具体实施方式中，压迫元件采用聚乳酸(polylactic，pla)制备而成。pla是一种无毒无刺激的合成高分子材料，其原料是乳酸，不含任何金属。h62黄铜棒或pla棒在体内，即不会受磁疗、电疗引起的磁场、电场干扰，也不会对磁疗、电疗仪器及磁共振仪器产生不良影响。可以严格控制实验条件，增强实验材料的可比性。

即为本发明构建的一种pirb基因敲入的小鼠动物模型。本发明所采用第二种技术方案的特点还在于，步骤1中得到grna1和grna2后分别与trancrrna在25℃孵育10min形成二级结构。步骤3中grna1、grna2的浓度均为2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射浓度为30～100ng/μl。步骤4中southern杂交采用bamhi和avrii核酸内切酶切割f1代杂合子小鼠的dna。本发明的有益效果是：本发明提供了pirb基因敲入的小鼠动物模型及其构建方法，本发明的小鼠动物模型对于pirb基因功能的研究和在体验证提供了良好的基础。分离自pirb基因敲入小鼠的细胞还可以用于研究pirb发挥调节作用的下游机制。通过pirb敲入动物模型与不同类型cre小鼠的杂交，可以用于研究ad不同***或不同细胞类型pirb的调节作用。附图说明图1为本发明pirb基因敲入的小鼠插入pirb基因cds和loxp位点的打靶质粒载体的构建图；图2为本发明pirb基因敲入的小鼠模型的构建方法的流程图；图3为本发明f1代pirb敲入的小鼠的基因型pcr结果鉴定电泳图；图4为本发明f1代pirb敲入的小鼠验证pirb基因敲入效果的测序峰图；图5为本发明f1代pirb基因敲入的小鼠进行southern鉴定的方法示意图；图6为本发明f1代pirb基因敲入的小鼠进行southern鉴定的结果图。这类动物疾病模型是指各种疾病共同性的一些病理变化过程的模型。杨浦区疾病动物模型建模

避免了在人身上进行实验所带来的风险。浦东新区大鼠疾病动物模型建模

动物模型名称：皮肤浅II°及深II°烫伤大鼠模型2、实验动物种属：SD大鼠3、实验动物性别：雌雄不限4、实验动物年龄：成年5、实验动物体重：160-200g6、实验动物环境：SPF级1、实验方法：热力致皮肤损伤法。麻醉大鼠，根据体重腹部备皮，然后固定于实验台上。将大鼠移近加热纯净水的烧杯，将纱布条浸入热水中，待水温恒定于99℃时，取出纱布，立即平铺于待烫部位，于纱布接触大鼠皮肤后开始计时。致伤3s为浅II°烫伤，致伤10s为深II°烫伤。2、检测标准：a.皮肤大体观察：致伤3s大鼠局部皮肤发红、轻微水肿。愈合后毛发生长良好，有少量红褐**素沉着，皮肤轻微挛缩，表皮光滑；致伤10s大鼠局部皮肤发白、水肿。愈合后毛发生长良好，皮肤瘢痕形成，表面粗糙不平。b.皮肤组织病理学观察：致伤3s大鼠表皮层次尚清楚，细胞明显肿胀、变性，层次结构尚清楚，细胞核结构不清；致伤10s大鼠表皮细胞部分脱落，结构不清，明显变性、坏死，部分细胞已溶解。浦东新区大鼠疾病动物模型建模