提供疾病动物模型建模评价

pcrmix：反应条件：pcr扩增产物的电泳鉴定结果如图3所示，从图3中可以看出，6、8、9号为pirb基因敲入小鼠在、，wt小鼠pcr产物没有这两个扩增产物。(c)短链pcr反应，引物如下：primers(℃):forwardprimer(f4):5’-aacaatcaggctgccgaatctg-3’reverseprimer(r4):5’-ctttattagccagaagtcagatgc-3’expectedpcrproduct:targetedallele:344bppirb基因敲入型小鼠能够扩增出344bp的产物，而野生型没有。pcr体系：反应条件：(2)f1代小鼠测序：通过pcr扩增后测序鉴定小鼠基因型，如图4所示，为6号pirb基因敲入小鼠测序峰图，pcr所用引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1：5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer(r3):5’-atactccgaggcggatcacaa-3’(3)southern杂交检测f1代小鼠基因型：采用bamhi和avrii核酸内切酶切割dna分子，切割示意图如图5。具体的southern杂交检测过程如下：步骤a、提取f1代小鼠尾部dna；步骤b、制备探针，通过pcr方法将dig-dutp渗入到步骤a的dna分子中。能够准确模拟人相关特定功能与疾病特征。提供疾病动物模型建模评价

    缺点：该移植模型的原发出现与转移发生之间时间间隔短，不利于药物药效研究;且细胞为鼠源，与人类有一定的差异。2异种移植模型异种移植模型是将人类的细胞或组织移植入免疫缺陷型实验动物体内。此模型一般采用免疫缺陷型小鼠，例如无胸腺裸鼠、CB17-SCID小鼠、NOD/SCID小鼠、NSG小鼠。一般来说，免疫缺陷程度越高，成瘤性越好。的相关研究中，人源细胞系异种移植(cell-line-derivedxenograft，CDX)模型和患者组织异种移植(patient-derivedxenograft，PDX)模型已得到广泛应用。CDX模型方法：将5×106的人A375黑色素瘤细胞皮下注射NOD/SCID小鼠腹侧的双侧，成功构建黑色素瘤CDX模型。PDX模型方法：有研究者将93个新鲜的患者组织切成2×2×2mm3碎片的大小，皮下接种6周大的NOD/SCID雌性小鼠，建立PDX模型。优点：保留了病人的组织学和遗传学特征，可模拟溃疡状态对人类黑色素瘤预后的影响。缺点：此模型移植后的潜伏期长，连续传代后鼠基质被人类基质替代，移植率可变，免疫系统受损，有移植物抗宿主病的可能性以及某些免疫细胞功能的缺乏。三、转基因小鼠模型可以通过异位表达基因，引入特定的致突变或灭活抑制基因来对小鼠进行转基因黑色素瘤模型的构建。浦东新区如何使用疾病动物模型建模可以克服人类某些疾病潜伏期长，病程长和发病率低的缺点。

该模型能够帮助我们研究pirb基因在免疫系统和神经系统的功能以及下游的调节机制。本发明的另一目的在于提供上述小鼠动物模型的构建方法。本发明所采用的第一种技术方案是：pirb基因敲入的小鼠动物模型，包括确定pirb基因的待敲入的特异性靶位点grna1和grna2，将pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的内含子1内，所述grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如。本发明所采用的第二种技术方案为：pirb基因敲入的小鼠动物模型的构建方法，具体按照以下步骤实施：步骤1、基于crispr/cas9技术构建针对c57bl/6j小鼠rosa26基因的特异性grna1和grna2，grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如；步骤2、构建“cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya”基因盒打靶载体，将打靶载体进行线性化处理；步骤3、步骤2中将含有loxp位点打靶载体、步骤1中有活性的grna1和grna2与cas9蛋白共同注射进入**小鼠受精卵中，获得f0代小鼠；步骤4、将步骤3中性成熟的阳性f0小鼠分别与野生型鼠交配繁一代，获得f1代杂合子小鼠，通过pcr、测序和southern杂交确定动物基因型；步骤5、将步骤4获得的f1代杂合子小鼠近交获得f2代纯合子小鼠。

动物模型名称：FSH联合HCG致超排怀孕小鼠模型2、实验动物种属：KM小鼠或NIH小鼠3、实验动物性别：雌性4、实验动物年龄：3~4周龄5、实验动物体重：16~18g6、实验动物环境：SPF级1、实验方法：注射用重组人促卵泡***（FSH）联合注射绒促性素（HCG）诱导。对雌鼠于按5IU/只腹腔注射50IU/mL的FSH溶液，注射46~48h后按5IU/只再腹腔注射50IU/mL的HCG溶液，并于注射HCG当天下午约16：00~17：00按雌雄鼠1：1合笼。次日早上检查雌鼠阴栓情况。2、检测标准：合笼后次日雌鼠检查出现阴栓，表明成功构建了超排怀孕小鼠模型。动物疾病模型广泛应用于疾病机制研究。

实验期间每天进行阴道涂片，观测动情周期变化。进一步地，检测***水平是指：检测雌***(e2)、促卵泡生长素(fsh)和促黄体生成素(lh)的水平。进一步地，检测对比卵巢重量是指：比较各组大鼠双侧卵巢脏器系数。进一步地，阴道涂片是指：采用阴道脱落细胞涂片法，使用染色剂为亚甲基蓝。本发明利用顺铂成功地建立了大鼠卵巢早衰模型，为基础研究建立稳定的卵巢早衰动物模型奠定了良好的基础。本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。什么是疾病动物模型建模？闵行区疾病动物模型建模优势

早期阶段科学假说与疾病潜在药物治疗效果评价始于小鼠疾病模型构建及其实验室研究。提供疾病动物模型建模评价

动物模型名称：酒精诱导的肝硬化大鼠模型2、实验动物种属：SD大鼠3、实验动物性别：雄性4、实验动物年龄：5周5、实验动物体重：150g-160g6、实验动物环境：SPF级。1、实验方法：用酒精诱导法。大鼠每天按10mL/kg体重灌服酒精混合物（酒精：吡唑：玉米油＝10mL：25mg：2mL）造模，每周2次按0.3mL/kg剂量腹腔注射给予CCl4:橄榄油＝1：3，连续灌服60天。解剖取肝脏进行组织病理学检查。2、检测标准：肝组织可见肝硬化病理改变（S1级~S4级）。提供疾病动物模型建模评价