注:1)培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态;2)孵育时间至少2小时,可延长至24小时后再检测也可以。4、以1×PBS清洗细胞两次,每次5分钟,以除去未掺入RNA的EU残留。注:贴壁不牢的细胞可降低清洗强度。细胞的固定和通透1、每孔加入150μl细胞固定液,室温培养30分钟,弃固定液;注:1)该试剂盒配备了细胞固定液,也可以使用含4%多聚甲醛的PBS来进行细胞固定;2)如果使用其他的细胞固定剂建议用DEPC水来配置,避免RNA酶降解细胞内的RNA。2、每孔加入150μl2mg/ml甘氨酸,摇床孵育5分钟;3、弃甘氨酸溶液,每孔加入300μlPBS洗液,室温清洗5分钟;4、每孔加入300μlTritonX-100细胞通透液,室温通透10分钟,弃细胞通透溶液;5、每孔加入300μlPBS洗液,室温清洗5分钟;EU染色1、通过用10:1去离子水稀释10×反应缓冲液进行配制1×EU反应缓冲液;2、按照溶解200mg缓冲添加剂溶于1ml去离子水的比例称取适量的粉末进行溶解,即为可用的缓冲添加剂的浓度,建议现用现配;注:缓冲添加剂为白色粉末,较难准确称量,称量范围可稍微放宽,但是不应超过±20%,且该粉末较易氧化,使用后请旋紧管盖,如试剂出现棕黄色,则需报废或更换。EdU细胞增殖检测试剂盒哪家便宜?上海东寰告诉您。江西正规EdU细胞增殖检测试剂盒优势
按照以下的表格进行染色反应液的配制:染色反应液组分500μl1ml2ml5ml1×反应缓冲液430μl860μlmlml催化剂溶液20μl40μl80μl200μlTAMRA红色荧光溶液μlμl5μlμl缓冲添加剂50μl100μl200μl500μl3、每孔加入100μl配置好的检测混合液,以覆盖细胞为宜,避光、室温孵育30分钟;4、弃染色反应液,加入100μlTritonX-100细胞渗透液清洗2-3次,每次10分钟;5、弃细胞渗透液,用PBS洗两次,每次5分钟。DNA染色1、将Hoechst33342用RNase-free水溶液1:1000进行稀释得到终浓度为5μg/ml的1×Hoechst染色液;2、每孔加入100μl1×Hoechst染色液,室温避光孵育20-30分钟后,弃染色液;3、每孔加入100μlPBS洗细胞两次,去掉洗液。图像获取及分析建议染色完成后立即进行荧光显微镜拍照观察;如果条件限制,请于4°C条件下避光湿润保存3天之内完成拍照。若为细胞爬片或涂片,可使用抗荧光淬灭封片剂进行封片后于4°C条件下保存及拍照检测。福建哪家公司提供EdU细胞增殖检测试剂盒评价EdU细胞增殖检测试剂盒的原理是什么?上海东寰告诉您。
直接测定DNA合成是细胞增殖检测的准确方法之一,的EdU细胞增殖检测试剂盒采用另外一种胸腺嘧啶核苷酸类似物-EdU(5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷),在细胞增殖时EdU能够插入正在复制的DNA分子中,利用EdU与染料之间的点击化学(ClickChemistry)反应可以进行高效快速的细胞增殖检测分析,可以有效地检测处于S期的细胞百分数。与传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法相比(图1),更简单,更快速,更准确。EdU只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内更容易扩散,不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理,有效地避免了样品损伤,有助于在组织的整体水平上观测细胞增殖的真实情况,具有更高的灵敏度和更快的检测速度。EdU分析方法反应条件比较温和,我们提供的一系列AndyFluor™染料标记可以用于多色通道选择。
普遍应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复等方面的研究。传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法需要DNA变性、抗原修复、抗原抗体过夜孵育等复杂繁琐的操作步骤。而EdU检测方法不需要剧烈的DNA变性,只需温和的细胞固定化和透化处理,能够较好地保护细胞形态、DNA整体结构及细胞内抗原识别位点,操作步骤更加快速、灵敏和准确。EdU与胸腺嘧啶(T)结构非常相似,而EdU染料大小只有BrdU抗体的1/500,在细胞内很容易扩散,无需DNA变性(酸解、热解、酶解等),可有效避免样品损伤,而且无需抗原抗体反应,能在细胞和组织水平更快速便捷地反映DNA复制活性上海哪家EdU细胞增殖检测试剂盒厂家值得信赖?
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EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子,通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比,EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内很容易扩散,无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)即可有效检测,可有效避免样品损伤,在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。江西正规EdU细胞增殖检测试剂盒优势