步骤3、pmsg处理c57bl/6雌性小鼠(6周龄,平均体重20g),46h后注射hcg,与雄性小鼠合笼交配,次日取受精卵进行显微注射,将步骤1的grna1、grna2、cas9蛋白以及线性化后的打靶载体一起注射到受精卵中,取注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠体内,产出小鼠,即f0代小鼠。上述步骤中grna1、grna2的浓度均为2~10pmol/ul,cas9蛋白的注射浓度为30~100ng/μl,cas9蛋白购自newenglandbiolabs,货号为m0386m。步骤4、提取f0代小鼠尾部dna,pcr扩增产物测序,鉴定是否为嵌合体。本发明用于f0代小鼠pirb基因pcr鉴定的特异性引物如下:pcrprimers1(℃):5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’。primers1对应的扩增产物大小为,primers2对应的扩增产物为。用于f0代小鼠测序的引物如下:sequencingprimerforpcrproduct1:5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer。疾病动物模型建模实验室。皮肤疾病动物模型建模优势
2mg组、4mg组、6mg组lh水平均上升,同样,只有2mg组有明显升高(p<),如图3所示。表3表4②体重变化:(mean±sd),如图4所示:2mg组(连续注射7天)与空白组相比,大鼠体重***下降(p<,注射第2天开始)。3mg组(连续注射7天)与空白组相比,大鼠体重***下降(p<,注射第4天开始),直至第12天*存活1只大鼠。4mg、6mg组(第1、8天注射)与空白组相比,大鼠体重分别在***次及第二次注射后的有***下降(p<),4mg组体重在停止给药后4天与空白组无差异。③卵巢重量:如表5、图5所示,2mg、6mg组大鼠在经过顺铂注射后卵巢重量相比对照组,都有不同程度缩减,其中2mg组卵巢重量明显减轻(p<),4mg、6mg组无明显差异。表5④动情周期观察(阴道涂片):3mg组动物死亡时间早,无完整的动情周期。如表、图6所示。正常大鼠动情周期4-5天。分为四个阶段,动情前期:撇圆形有核上皮细胞占绝大多数,白细胞和角化上皮细胞很少(图a)。动情期:角化上皮细胞占多大多数,由散在增至集白细胞和有核上皮细胞很少(图b)。动情后期:片状角化上皮细胞,有核上皮细胞和白细胞3种都有,无太大差异(图c)。动情间期:白细胞占绝大多数,有核上皮细胞和角化上皮细胞很少(图d)。表6⑤病理结果:如图7所示。江苏哪家公司提供疾病动物模型建模早期阶段科学假说与疾病潜在药物治疗效果评价始于小鼠疾病模型构建及其实验室研究。
pcrmix:反应条件:pcr扩增产物的电泳鉴定结果如图3所示,从图3中可以看出,6、8、9号为pirb基因敲入小鼠在、,wt小鼠pcr产物没有这两个扩增产物。(c)短链pcr反应,引物如下:primers(℃):forwardprimer(f4):5’-aacaatcaggctgccgaatctg-3’reverseprimer(r4):5’-ctttattagccagaagtcagatgc-3’expectedpcrproduct:targetedallele:344bppirb基因敲入型小鼠能够扩增出344bp的产物,而野生型没有。pcr体系:反应条件:(2)f1代小鼠测序:通过pcr扩增后测序鉴定小鼠基因型,如图4所示,为6号pirb基因敲入小鼠测序峰图,pcr所用引物如下:sequencingprimerforpcrproduct1:5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer(r3):5’-atactccgaggcggatcacaa-3’(3)southern杂交检测f1代小鼠基因型:采用bamhi和avrii核酸内切酶切割dna分子,切割示意图如图5。具体的southern杂交检测过程如下:步骤a、提取f1代小鼠尾部dna;步骤b、制备探针,通过pcr方法将dig-dutp渗入到步骤a的dna分子中。
疾病动物模型和人类的关系科学研究是探索未知,实验研究的结果往往会出乎意外,不受人为的控制,所以关乎人类本身的研究,在人体上进行试验,风险很大;对一些数量很少的珍稀动物,或一些因体型庞大,不易实施操作的种类,往往用取材容易,操作简便的另一种动物来进行实验研究,代替人类或原来的目标动物,这就是动物实验。为了保证这些动物实验更科学、准确和重复性好,用各种方法把一些需要研究的生理或病理活动相对稳定地显现在标准化的实验动物身上,供实验研究之用。这就称之为动物实验中的动物模型。必须真正了解研究者感兴趣且需要的小鼠疾病模型。
特发性肺纤维化模型小鼠(右)相对于对照组小鼠肺部组织MASSON染色对比(4周)5.急性肺损伤模型急性肺损伤(acutelunginjury,ALI)是各种直接和间接致伤因素导致的肺泡上皮细胞及内皮细胞损伤,造成弥漫性肺间质及肺泡水肿,导致的急性低氧性呼吸功能不全。以肺容积减少、肺顺应性降低、通气/血流比例失调为病理生理特征,临床上表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫,肺部影像学上表现为非均一性的渗出变,其发展至严重阶段(氧合指数<200)被称为急性呼吸窘迫综合征(acuterespiratorydistresssyndrome,ARDS)。5.1急性肺损伤大鼠模型建立什么是疾病动物模型建模?松江区泌尿疾病动物模型建模
很多自发性动物模型在研究人类疾病时具有重要的价值。皮肤疾病动物模型建模优势
腰椎间盘突出是造成全球大部分地区工作缺失和活动受限的主要疾病,随着日常生活节奏的不断加快,腰椎间盘突出症已经成为临床脊柱外科的常见病和多发病,而且发病人群越来越呈现年轻化及普遍化的趋势。该病主要是由于腰椎长期的受力不均或突然性外伤,导致腰椎纤维环出现变形、破裂,纤维环、髓核及软骨终板单独或同时外突,从而压迫到坐骨神经、神经根或马尾神经,患者出现腰部疼痛,牵连股部,下肢足部放射性疼痛,引起神经功能、运动功能障碍,特定身体部位出现麻痹或瘫痪症状。良好的腰椎间盘突出动物模型的建立,可以生动直观的帮助医疗工作者理解腰椎间盘突出压迫神经后,神经的病理生理变化以及疾病的发***展规律,并可以通过成熟的动物模型,探索有效的***方法。近年来,随着对腰椎间盘突出症的认识研究的不断深化,人们希望通过建立一种可靠、有效的腰椎间盘突出的动物模型,通过施加干预因素,更加准确地观察模型体内产生的变化,探究人体内疾病发生机理,并将研究成果推广到临床,为***腰椎间盘突出症提供合理、有效的防治手段。因此。皮肤疾病动物模型建模优势
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