上样与计数操作1. 上样用 10μL 移液器吸取染色后的混合液,缓慢滴加到计数板的计数池中(避免产生气泡,若有气泡需重新上样)。确保液体充满计数池但不溢出(计数池容量通常为 10μL 左右,具体看耗材规格),放置 1-2 分钟让细胞沉降。2. 仪器计数将计数板放入仪器的样品槽,调整位置使镜头对准计数池。打开计数软件,选择参数:细胞类型(如 “动物细胞”“酵母”,仪器会根据大小阈值识别);稀释倍数(输入之前的稀释比例,如 2 倍);计数区域(部分仪器可选择全视野或特定区域)。点击 “计数” 按钮,仪器自动拍摄图像并分析:识别活细胞(透明、形态完整)和死细胞(蓝色),排除杂质和细胞团。30 秒内生成结果:细胞总数、活细胞数、死细胞数、活细胞率(活细胞数 / 总细胞数 ×100%)、浓度(个 /μL 或个 /mL)。液流中的细胞逐个通过激光检测区域,激光照射细胞后产生散射光和荧光信号。细胞计数仪厂家供应

工作原理:通常基于图像分析技术,通过光学系统对细胞悬液样本进行拍照,然后利用机器学习或人工智能算法对图像中的细胞进行识别和计数。部分仪器还可结合荧光染色技术,对特定标记的细胞进行检测和分析。特点:准确性高:采用先进的算法和光学系统,能精确识别细胞,减少人为计数误差,如赛默飞 Countess 3 自动细胞计数仪利用机器学习算法,可准确计数成团细胞并忽略碎片。自动化程度高:具备自动聚焦、自动调节光强度、自动上样等功能,只需将样品准备好放入仪器,即可快速得出计数结果,无需繁琐的手动操作。速度快:可在短时间内完成细胞计数,如 CCEasy 全自动高通量细胞计数分析仪能在 1 分钟内完成单个样品的制备及检测。功能多样:除了基本的细胞计数,还能进行活细胞与死细胞区分、细胞活力分析、细胞大小测量、细胞形态分析等,部分仪器支持多通道荧光检测,满足不同实验需求。数据管理方便:可自动保存数据,并支持多种格式输出,还能通过网络将数据传输到电脑或云端,便于数据的存储、分析和共享。高校高灵敏多色荧光成像细胞计数仪检测贴壁细胞(如 HEK293):需酶消化成单细胞悬液,优先选择光学成像法(避免消化不完全导致的细胞团干扰);

样本制备关键细胞悬液均匀性:细胞团会导致计数偏高(算法可能将团块误判为单个细胞),需充分吹打或过滤(用 40-70μm 细胞筛)。染色时间:台盼蓝染色超过 5 分钟可能导致活细胞被染色,影响活率计算,需严格控制时间。浓度适配:浓度过低(<1×10⁴个 /mL)会导致计数误差大,可减少稀释倍数;浓度过高(>1×10⁷个 /mL)会导致细胞重叠,需增加稀释倍数。2. 仪器与耗材维护计数板清洁:重复使用的计数板需用无水乙醇或 75% 酒精擦拭,避免残留细胞或染料影响下次计数;禁止用硬物刮擦计数池。镜头保护:若图像模糊,用镜头纸轻轻擦拭镜头,勿用酒精或其他试剂。定期校准:按仪器说明书定期校准(如用标准微球溶液),确保计数准确性。3. 结果验证若对结果存疑,可通过显微镜手动计数(血细胞计数板)进行比对。同一样本多次计数(3 次以上),取平均值以减少误差。
临床诊断与检验:在医学检验中,细胞计数是多种疾病诊断的重要依据:血液学检验:虽然常规血常规由血液分析仪完成,但特殊样本(如脑脊液、胸腔积液)的细胞计数可通过细胞计数仪快速完成,辅助诊断、转移等。病理检查:对活检组织消化后的单细胞悬液进行计数,或分析肿瘤细胞的数量及活性,为病情评估和治疗方案制定提供参考。微生物检测:部分细胞计数仪可用于酵母菌、细菌等微生物的计数,辅助性疾病的诊断(如性肺炎的病原菌定量)。直接显示细胞浓度(cells/mL),并生成计数直方图(显示细胞尺寸分布)。

验证仪器在不同浓度范围内的计数准确性,确认其是否符合说明书标注的线性范围(如 1×10⁴-1×10⁷个 /mL)。操作步骤:制备一份高浓度细胞悬液(如 2×10⁷个 /mL),用稀释液按1:2、1:4、1:8、1:16等比例梯度稀释。用自动计数仪对每个稀释度计数,记录实测浓度。以 “理论浓度”(稀释前浓度 × 稀释倍数)为横坐标,“实测浓度” 为纵坐标,绘制散点图并计算相关系数(R²)。若 R²>0.98,说明仪器在该范围内线性良好;若低浓度(如 <1×10⁴个 /mL)或高浓度(如> 1×10⁷个 /mL)时偏离线性,需避免在该范围使用,或通过浓缩 / 稀释调整浓度。在细胞治疗过程中,如 CAR - T 细胞疗愈、干细胞疗愈等,需要精确计数细胞数量。细胞计数仪厂家供应
结果记录:计数仪会显示细胞计数结果,包括细胞总数、活细胞数、死细胞数、细胞浓度等参数。细胞计数仪厂家供应
数据记录与验证保存计数结果(支持 Excel 或 PDF 导出),记录关键参数:浓度、活率、稀释倍数。重复计数:同一样本建议计数 3 次,取平均值(减少随机误差)。结果异常处理:若多次计数差异大,需检查细胞悬液是否混匀,或重新制备样本。实验后处理一次性计数板直接按生物废弃物处理;可重复计数板用 75% 酒精冲洗后晾干,避光保存。关闭仪器电源,清理台面,染液回收至废液桶。关键提示细胞均匀性:吹打细胞时动作轻柔,避免产生气泡或损伤细胞。染色时间:台盼蓝染色超过 5 分钟会导致活细胞着色,务必严格控制。浓度适配:若细胞浓度低于 1×10⁴个 /mL,建议离心浓缩后再计数(避免误差过大)。细胞计数仪厂家供应