免疫组化指的是根据抗体与抗原特异结合的原理来检测组织切片中的抗原(如蛋白)。immuno的词根来自操作中所使用的抗体,而histo意味着组织。另一种类似的技术是免疫细胞化学(Immunocytochemistry,简称ICC)。这两个词大家经常混着用,看着好像差不多,但实际上还是有点区别。IHCvsICC对于IHC,组织是来自患者或动物,经过冷冻或石蜡包埋。将这些组织制成约4μm厚的切片,封片后再处理。通过这种方法,研究人员可观察细胞组分的定位,同时维持周围组织的原先结构。对于ICC,大部分细胞外基质及其他基质组分被去除,只剩下整个细胞来染色。ICC的来源可以是细胞悬液,来自患者或动物(如血涂片、拭子等),或在实验室中进行的组织培养细胞系。 免疫组化失败的原因?安徽组织免疫组化实验
在临床应用中,免疫组化还可以进一步分类不同qi官与组织交界处cancer。由于重叠的特征,在一些组织qi官交界处的cancer,只凭组织学基础对cancer进行分类很困难。如胃肠道梭形细胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤,是间质起源的胃肠道间质瘤(GIST),还是神经起源的神经鞘瘤;同样发生于组织交界处的cancer有睾丸胚胎cancer与精原细胞cancer,两者较难区别,且医疗与预后明显的不同,但用免疫组化检测角蛋白就较易于区别:角蛋白阴性则为精原细胞cancer,而角蛋白阳性则为胚胎cancer。安徽组织免疫组化实验免疫组化常见问题原因分析!
确定cancer分期,免疫组化技术应用于临床可以进行处理哦,英瀚斯生物为您处理。cancer分期是判断预后的一个指标,与是否浸润、有无淋巴管或血管侵袭密切相关,而通过免疫组化方法可以判断cancer是否浸润、有无淋巴管或血管侵袭。层黏连蛋白和Ⅳ型胶原的单克隆抗体可以清楚的显示基膜的主要成分,用于区分原位*和浸润*,一旦上皮性*突破基膜为浸润,未突破基膜为原位;显示血管和淋巴管内皮细胞的标记物第八因子相关蛋白、D2-40等则可清楚显示cancer对血管或淋巴管的浸润。因此对许多cancer的良恶性鉴别及有无血管或淋巴管浸润,免疫组化结果作为主要的鉴别依据。
免疫组化中IHC vs ICC的区别。英瀚斯生物为您说明。除了生物学来源,IHC和ICC在样品处理的程度上也有所不同。ICC需要透化,要么通过固定过程,要么是单独的透化步骤,这样抗体才能与细胞内的靶点相结合。而IHC可能不要单独的透化步骤,这取决于切片的厚度和固定方法。包埋在石蜡中的IHC切片必须进一步处理,才能进行抗体染色。一旦处理好样品,IHC和ICC的染色操作就几乎没什么差异了。当然,就染色而言,根据所使用的抗体来优化还是少不了的。免疫组化如何得到好的效果?
免疫组化的DAB显色时间如何把握?
1、DAB显色时间不是固定的,主要由显微镜下控制显色时间,到出现浅棕色本底时即可冲洗;
2、DAB显色时间很短(如几秒或几十秒)就出现很深的棕褐色,这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长,需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间;
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3、此外,若很短时间就出现背景很深,还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全,需要延长封闭时间;
4、DAB显色时间很长(如超过十几分钟)才出现阳性染色,一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短(比较好一抗4度过夜);另一方面就是封闭时间过长。 免疫组化怎么做?步骤方法?宁夏靠谱免疫组化要多少钱
做免疫组化意味什么?安徽组织免疫组化实验
免疫组化的局限性,可能会有假阳性。阳性信号定位不正确即为假阳性,包括着色不匀、背景着色、边缘效应,另外组织的某些特定成分也能导致假阳性结果。假阳性可能的原因有:(1)一抗浓度及一抗是否失效,抗体有一个合适的浓度范围且必须在有效期内使用,过期的抗体或者不着色,或者背景着色,形成假阳性;(2)试剂未充分覆盖组织,组织边缘的试剂易干浓度较组织中间高致深染;(3)抗体孵育时间过长,由于室温的影响夏季孵育时间稍短,冬季孵育时间稍长;(4)操作过程中组织变干,造成组织边缘收缩或损坏形成伪影,产生假阳性;(5)3,3'-二氨基联苯胺(DAB)显色时间太长,DAB宜现配现用,配制时间比较好在30min以内;(6)由于胞浆里含有较多的蛋白质,因此间质和胞浆中出现很多非特异性的染色,如内源性酶血红蛋白、肌红蛋白等造成的着色,可以通过血清封闭解决;乳腺cancer组织中的脂肪细胞、淋巴细胞也会产生非特异性的染色;(7)非特异性抗体吸附常见于坏死组织中,使坏死组织呈较高的背景染色,在免疫组化中应避免选择坏死组织较多的蜡块。安徽组织免疫组化实验