S100 beta免疫荧光

免疫荧光间接法：如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗体—抗原—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为一抗体，其它步骤的抗原检查相同。标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，同于血清球蛋白有种的特异性，如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应，因此，制备标记抗体适用于任何抗原的诊断。免疫荧光技术在生物学研究、医学诊断和药物开发等领域具有普遍应用。S100 beta免疫荧光

细胞免疫荧光：细胞种板与细胞爬片制备：1) 细胞密度在90%-95%左右，用预热胰酶消化细胞后重悬细胞于完全培养基中，充分吹打，使之成单细胞悬液，计数。2)取细胞培养12孔板，在每个孔放爬片的位置根据爬片的大小，先在每个孔里准备放爬片的位置滴几滴培养基，然后将爬片置于液滴上，压紧，使爬片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起，防止加细胞悬液时爬片漂起，造成双层细胞贴片。根据自己的需要选择合适的细胞密度种入12孔板培养板内。3)24h或者48h后，根据细胞生长速度快慢，观察判断细胞密度，约90%时进行细胞免疫荧光。S100 beta免疫荧光免疫荧光细胞化学技术用于显示和检查细胞或组织内的抗原或半抗原物质。

细胞的固定及免疫荧光：注意事项：（1）取细胞爬片时，动作应轻柔，防止将细胞爬片夹碎，影响实验进程。（2）种细胞过程中，要注意将细胞轻柔混匀，“八”字或者“十”字形摇晃，防止细胞局部生长过密。（3）稀释、加二抗（荧光抗体）及此后的洗涤过程中注意避光。（4）细胞爬片进行免疫荧光之后，需要尽快拍照，防止免疫荧光淬灭。或者放于暗盒内，暂时保存于4度冰箱，尽快拍照。（5）在进行荧光显微镜拍照时，要根据荧光抗体选择合适的激发光源。PI/DAPI能将凋亡和未凋亡的细胞都染成红色/蓝色，只在凋亡的细胞核中才有FITC-12-dUTP掺入而定位的绿色荧光。

基于荧光成像的技术对于查询细胞和组织的结构和功能方面非常有用。当与免疫化学结合时，荧光成像技术的分析能力增加，增强了这种技术在普遍的研究和临床应用中的实用性，使其成为宝贵的工具。免疫荧光显微镜通过使活细胞成像能够可视化整个细胞器，彻底改变了细胞生物学领域。免疫组织化学和免疫细胞化学是结合抗原抗体结合能力进行细胞分析的常用荧光成像技术。免疫荧光（IF）是一种强大的免疫染色技术，利用显微镜观察与靶蛋白和其他目标分子结合的荧光素标记抗体。免疫荧光用于鉴定细胞中的细胞和组织特异性抗原；可视化蛋白质的存在与否、细胞定位和活化状态；并分析免疫反应。免疫荧光技术可以用于研究细胞迁移和细胞黏附。

细胞免疫荧光实验注意事项：根据所检测抗原所在位置来确认是否需要加入 Triton 进行通透。若所检测抗原表位位于膜蛋白的白外段，则不需要通透；一般 5% BSA 封闭即可达到效果；从加荧光二抗起，后面所有操作步骤尽量避光。缩短在荧光显微镜下的观察时间，1~2 h 为宜。染色后尽快荧光显微镜下观察，若不能可放入 4 ℃ 冰箱避光保存一周。无/弱染色：烤片温度过高，推荐 56~60 ℃ 1~2 h；一抗是否适用固定液和石蜡切片，使用浓度是否过低，孵育是否时间过短等。在实际工作中，荧光抗原技术应用较少，因此通常将其称为荧光抗体技术或免疫荧光技术。S100 beta免疫荧光

免疫荧光技术可以通过荧光显微镜观察样品中的荧光信号，从而确定目标分子的存在和位置。S100 beta免疫荧光

免疫荧光应用范围：其应用范围极其普遍，可以测定内分泌、蛋白质、细胞因子、细胞表面抗原、多肽、核酸、受体、神经递质、肉瘤标志物、血药浓度等各种生物活性物质。根据诊断类别，又可分为传染性疾病、内分泌、药物检测、免疫学、血型鉴定等。免疫荧光实验步骤：洗涤：PBS洗涤5min*3次。封闭：使用封闭液对样本进行封闭，一般1h。加一抗：使用合适浓度的一抗与样本4℃过夜。洗涤：PBS或PBST洗涤5min*3次。加二抗：使用间接法时需要加二抗处理，根据说明书使用合适的浓度，避光处理1h（后面步骤均需避光）。洗涤：PBS或PBST洗涤5min*3次。封片：滴一滴防淬灭剂，封片。可立即观察后暂存4℃尽快观察。S100 beta免疫荧光