培养平板培养基是被用于获得微生物纯培养的很常用的固体培养基形式,它是冷却凝固后的固体培养基在无菌培养皿中形成的培养基固体平面,常被简称为培养平板。也叫平面培养基、平皿培养基。平板培养基常用于单孢分离,测定菌丝生长速度,观察菌落的形态,拮抗实验,测定接种空间杂菌数。平板培养基制作方法如下:将培养皿洗净、干燥,使各培养皿盖方向一致,用牛皮纸包好,或放入特制铁罐内,注明皿盖的方向。高压灭菌或干燥灭菌后备用。取刚灭菌后尚未凝固的培养基置于无菌箱或超净工作台内,先左手持三角瓶,右手反转手掌用中指和无名指拨出棉塞或硅胶赛(或不翻转手掌用小指和手掌拨出棉塞),同时将三角瓶转换至右手,而后左手拿平皿,以大拇指和中指将皿盖打开一缝,至瓶口刚好伸人。三角瓶口经火焰烧灼后,倾入灭菌或溶化、冷却至55~60°C的培养基约15mL(勿使瓶口靠在平皿壁上,以免沾染皿壁),迅速盖好皿盖,置于桌上轻轻旋转平皿,使培养基均匀分布于整个平皿底部,冷凝后即为平板培养基。有时凝固后的培养基表面有冷凝水,可将平皿盖打开倒置于37℃温箱,除去冷凝水,否则将影响平板分离培养效果。为防止冷凝水过多,也可将培养基冷却至45~50°C再倒平板。密封圈老化泄漏应及时更换耐高温配件。自动搅拌培养基制备器售后服务
培养基的实验室制备:―般要求:正确制备培养基是微生物检验的好基础步骤之一,使用脱水培养基和其他成分,尤其是含有有毒物质(如胆盐或其他选择剂)的成分时,应遵守良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明。培养基的不正确制备会导致培养基出现质量问题。使用商品化脱水合成培养基制备培养基时,应严格按照厂商提供的使用说明配制。如重量(体积)、pH制备日期、灭菌条件和操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时,应按照配方准确配制,并记录相关信息,如:培养基名称和类型及试剂级别、每个成分物质含量、制造商、批号、pH、培养基体积(分装体积)、无菌措施(包括实施的方式、温度及时间)、配置日期、人员等,以便溯源。广东自动搅拌培养基制备器Systec培养基制备器采用模块化设计,适配多种培养基类型需求。
微生物检验培养基制备的要点:培养基分装,准备好的中.海培养基根据用途不同分为烧瓶、试管等容器,分装试管量大采用自动分液器,分装试管量小,可以用漏斗分液。分液量不超过容器体积的三分之二。三角瓶不要超过体积的二分之一;琼脂斜面不要超过试管长度的五分之一。灭菌后斜面应为培养基量的三分之一,底层应为培养基量的三分之二;半固态琼脂的体积为三分之一;用于接种或保护细菌的高级琼脂,分装试管长度的三分之一和四分之一,接种厌氧菌的量应达到三分之二;琼脂平板90毫米内径13~15毫升,内径70毫米8~10毫升。如果琼脂平板表面较水,可将平板倒置,置于37℃培养箱中三十分钟,晾干后使用。每批培养基分装在二十毫升左右的小玻璃瓶中,与该批培养基同时灭菌,在以确定这批培养基的很终pH值。
配制培养基的原则:灭菌处理:为了避免杂菌污染,获得微生物纯培养物,培养基必须及时严格灭菌。通常采用高压蒸汽灭菌。一般培养基用0.IMPa(121℃)维持15~30min即可彻底灭菌。长时间的高温灭菌会使某些不耐热的物质破坏,如使糖类物质形成氨基糖、焦糖。因此,含糖培养基常用0.05MPa(110℃)灭菌20~30min某些对糖类要求更高的培养基,可先将糖过滤除菌或间歇灭菌,再与其他已灭菌的成分混合。长时间高温灭菌也会使磷酸盐、碳酸盐与钙、镁铁等阳离子形成难溶性化合物而产生沉淀。为了防止这类沉淀发生,可将这些物质分别灭菌,冷却后再混合;也可在培养基中加入少量整合剂(0.01%乙二胺四乙酸,即EDTA)使金属离子形成可溶性络合物,防止沉淀的产生。高压蒸汽灭菌一般使培养基pH降低,应在配制培养基时加以调节。通过国际安全认证,满足生物安全实验室等级要求。
牛肉膏蛋白胨液体培养基(又称营养肉汤,用于培养细菌):成分:牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g,蒸馏水(或去离子水)1000mL,pH7.4士0.2。制法:将各成分溶解于水中,于20~25℃条件下以1mol/LNaOH溶液用pH计校正pH7.4,分装三角瓶(装量以三角瓶容积的1/2~2/3为宜),或试管(分装量以试管高度的1/4左右为宜),0.1MPa灭菌15~20min后备用。化学分类:天然培养基指一类利用动、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基等。组合培养基又称为合成培养基或综合培养基,是一类按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯化学试剂配制成的培养基。如葡萄糖铵盐培养基、淀粉硝酸盐培养基等。半组合培养基指一类主要以化学试剂配制,同时还加有某种或某些天然成分的培养基。例如,马铃薯蔗糖培养基。培养基中的维生素、生长因子等易受高温破坏,高效加热缩短热暴露时间,减少降解。黑龙江琼脂培养基制备器
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微生物发酵培养基配制注意事项:①养分浓度和配比合适:微生物只有在培养基中养分浓度合适的情况下才能生长良好是合适的。当养分浓度过低时,不能满足微生物正常生长的需要。②微生物培养基pH条件控制:培养基的pH必须控制在一定范围内,以满足不同种类微生物的生长繁殖或产生代谢物。各种微生物生长繁殖或代谢产物产生的较佳pH条件不同。通常细菌和放线菌适合在7~7.5pH范围内生长,酵母菌和霉菌一般在4.5~6pH范围内生长。③微生物培养基原料来源选择:培养基配制时,应尽可能使用低廉易得的原料作为培养基成分。尤其在发酵行业,培养基用量大,使用成本较低原料实现产品附加价值。例如在微生物单细胞蛋白的工业化生产过程中,制糖业含蔗糖废液、乳业含乳糖废液、大豆废液工业和黑色废物、造纸工业中含有戊糖和己糖的亚硫酸盐纸浆等经常被作为培养基原料使用。④成品培养基灭菌处理、为了获得微生物的纯培养物,必须避免被细菌污染,所以对使用的设备和工作场所进行消毒和消毒。对于微生物培养基要进行严格的灭菌处理。自动搅拌培养基制备器售后服务