培养基的使用:1.琼脂培养基的融化:将培养基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法(如高压锅中的蒸汽)融化。经过高压灭菌的培养基尽量减少重新加热的时间,避免过度加热。培养基融化后立即移开,室温静置片刻(约2min),以免玻璃容器发生破裂。融化后的培养基放入47℃~50℃恒温水浴锅中保温,冷却到47℃~50℃所需的时间取决于培养基的类型、体积和在水锅里的分装量。融化后内培养基应尽快使用,放置时间一般不超过4h。剩余的培养基固后不得再次融化使用。特别是灵敏性培养基,应根据相关标准,缩短融化后放置的时间。培养基制备器全自动程序,无人值守;分装过程无需人工干预。自动搅拌培养基制备器厂家
培养基制备的基本方法和注意事项:1.培养塞pH的初步调整培养基各成分完全溶解后,应进行pH的初步调正,因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化,例如,牛肉浸液约可降低pH0.2.而肠浸液pH却会有明显的升高。因此,对这个步骤,操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的较终pH,保证培养基的质量。pH调正后,还应将培养基煮沸数分钟,以利培养基沉淀物的析出。2.培养基的过滤澄清液体培养基必须澄清,琼脂培养基也应透明无明显沉淀,因此,须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法,滤纸应拆叠成折扇成漏斗形,以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。自动搅拌培养基制备器厂家在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分。
微生物检验培养基制备的要点:培养基倒入平板,将灭菌溶化的培养基冷却至五十度后,倒入无菌干燥的培养皿中。微生物培养基制备的温度不能太高,否则培养皿内盖容易形成过多的冷凝水;温度太低,中海培养基容易凝固成块状,不能做成平板。倒平板时,要靠近酒精的火焰以防止外来细菌落入盘中。左手托住培养皿,右手托住三角瓶底部。用小指和手掌拉出锥形瓶的棉塞,烧灼烧瓶口,用拇指和食指在培养皿盖上打开一条缝,直到烧瓶口刚好伸手进去,倒入培养基,直到底部被覆盖。不要超过培养皿高度的三分之一,迅速盖上盖子,放在桌子上,轻轻旋转培养皿,使培养基分布均匀,凝结后即可。
培养基中血清的质量标准:血清质量高低取决于两方面因素:一是取材对象,二是取材过程。用于取材的动物应健康无病并且在指定的出生天数之内,取材过程应严格按照操作规程执行,制备出的血清要经过严格的质量鉴定。《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求:牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。并应具备适当的监测系统。有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。血清要通过滤膜过滤除菌,保证无菌。无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染,有些国家要求无细菌噬菌体污染。对细胞有良好的支持繁殖作用。在液体培养基中的培养称为液中培养、液体培养或液内培养。
培养基的物理灭菌方法:(一)加热灭菌法:加热可破坏微生物中酶、蛋白质和核酸,导致微生物死亡。加热灭菌又分干热灭菌法和湿热灭菌法。在同一温度下,湿热灭菌的效果比干热灭菌好。主要是因湿热灭菌时,有水分存在,蛋白质容易变性。水分又易使微生物膜壁润湿,湿热的穿透力比干热大。常用的有火焰灭菌法与干热空气灭菌法两种。(二)紫外线灭菌法:是指用紫外线照射杀灭微生物的方法。一般用于灭菌的紫外线波长是200~300nm,灭菌力较强的波长是253.7nm。紫外线作用于核酸蛋白促使其变性,同时空气受紫外线照射后产生微量臭氧,从而起共同杀菌作用。紫外线进行直线传播,可被不同的表面反射,穿透力微弱,但较易穿透清洁空气及纯净的水。培养基制备器完全称取完毕后,还应进行一次检查。自动搅拌培养基制备器厂家
全自动培养基制备仪主要特点:无需排干空气。自动搅拌培养基制备器厂家
平板的制备和储存:倾注融化的培养基到平皿中,使之在平皿中形成厚度至少为3mm(直径90mm的平皿,通常要加入18mL〜20mL琼脂培养基)。将平皿盖好皿盖后放到水平平面使琼脂冷却凝固。如果平板需储存,或者培养时间超过48h或培养温度高于40℃,则需要倾注更多的培养基。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和(或)5±3℃冰箱的密封袋中,以防止培养基成分的改变。在平板底部或侧边做好标记,标记的内容包括名称、制备日期和(或)有效期。也可使用适宜的培养基编码系统进行标记。将倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延长储存期限。为了避免冷凝水的产生,平板应冷却后再装入袋中。储存前不要对培养基表面进行干燥处理。对于采用表面接种形式培养的固体培养基,应先对琼脂表面进行干燥:揭开平皿盖,将平板倒扣于烘箱或培养箱中(温度设为25~50℃);或放在有对流的无菌净化台中,直到培养基表面的水滴消失为止。注意不要过度干燥。商品化的平板琼脂培养基应按照厂商提供的说明使用。自动搅拌培养基制备器厂家