膜片钳电生理技术服务的数据如何处理:1.内面向外式膜片细胞内外和电极内的溶液均可调控,既能较容易地改变细胞内的离子或物质浓度,又能把酶等直接加于膜的内侧面,适宜研究胞内物质对通道活动的影响。但实验中难以改变膜外侧物质,且需浸于低钙液中。常用于研究依赖细胞内钙的离子通道,如钙敏感的钾通道,还可用于细胞内和第二信使与通道的调节作用。2.外面向外式膜片能接触膜的两侧,可以任意改变膜外物质的浓度,有利于研究离子、递质对膜外表面的作用,多用于研究细胞膜外侧受体控制的离子通道。这些受体直接作用于离子通道,而不需经过第二信使系统。因细胞外液容易更换,故加药方便。缺陷是实验中难以改变胞内成分,而且电极管内必须充以低钙液。膜片钳的数据如何处理:细胞钳记录的是许多通道的平均电流,有利于综合分析。膜片钳使用操作注意:电热加热线温度很高,在使用时注意避免烫伤。金华药理学膜片钳电生理技术研究方案
膜片钳电生理纪录系统及记录方法:膜片钳技术是用于纪录全细胞或个别细胞膜上离子信道电生理特性的研究方法,目的在于提供基础研究知识与新药开发时研究细胞电特性或小分子药物对细胞膜上离子信道特性的影响,替开发标靶药物提供一个测试平台。传统的细胞培养膜片钳系统由人工操作,实验人员在取得元代细胞(例如心肌细胞与神经元)后,将研究对象细胞养在玻片上,以手动方式将纪录电极移动放置在胞体上方并压到细胞膜上,此时纪录电极在膜外溶液里的电阻大约为3-9 ΜΩ。金华药理学膜片钳电生理技术研究方案膜片钳的应用:在通道电流记录中,可分别于不同时间、不同部位施加各种浓度的药物来研究。
膜片钳实验难度大、技术要求高,要掌握有关技术和方法虽不是很困难的事,但要从一大批的实验数据中,经过处理和分析,得出有意义、有价值的结果和结论,就显得不那么容易,有许多需要注意和考虑的问题,包括减少噪音,避免电极前端的污染,提高封接成功率,具体实验过程中还需要考虑如何选取记录模式,为记录特定离子电流如何选择电极内、外液,如何选择阻断剂、激动剂,如何进行正确的数据采集等许多更为复杂的问题,还需在科研实践中不断地探索和解决。
膜片钳技术之全细胞记录的实验流程:(1)破膜:加大微电极内的负压将细胞膜吸破,此时可见时间常数较大的全细胞膜电容电流的出现,以及方波电流的轻微加大。①可用嘴吸;②也可用注射器施加负压;③还可以在施加负压的基础上进行电击穿来破膜。若只用电击穿破膜,形成的入口电阻Ra较大。(2)细胞破膜后,若所用浴液的渗透压比电极内液的渗透压略高,则应该将所施加的负压力在几秒内或几十秒内去掉;反之,适当保留一点负压对破膜状态及细胞的稳定更有利。(3)全细胞膜电容补偿:调节全细胞膜电容补偿板块中的Cm和Rs进行膜电容电流补偿,使输出电流信号中细胞膜电容电流成分消失或变至较小。(4)串联电阻补偿:打开串联电阻补偿键,调节串联电阻补偿至不产生震荡为度。(5)漏减调节。(6)正式进入标本细胞的检测。膜片钳实验要从一大批的实验数据中,经过处理和分析,得出有意义、有价值的结果和结论。
膜片钳电生理技术的记录方式:全细胞记录法,膜穿孔记录法(perforatedpatchclamp),巨膜片钳记录法(giantmembranepatchclamp),松散封接记录法(loosepatchclamp)等技术应用:1.为了更换电极内液和从电极内施加药物,发展了微电极内灌技术(micropipetteperfusiontechnique)2.在研究细胞间的缝隙连接(gapjunction)通路时,发展了双膜片钳记录法(doublepatchrecording)3.将富含神经递质受体的游离膜片钳靠近突触部位,可检测递质释放和突触活动,这一技术称为膜片钳探针技术(detector-patchtechnique)4.将特异的膜片探针插入卵母细胞,可检测细胞内第二信使含量,此为膜片填塞技术(patchcrammingtechnique)5.为研究细胞的胞吞与胞吐机制,发展了膜电容测定法(membranecapacitancemeasurement)。全自动膜片钳系统技术指标:操作简单,全过程可自动化。金华药理学膜片钳电生理技术研究方案
膜片钳使用操作注意:封接范围内细胞膜光有少数离子通道。金华药理学膜片钳电生理技术研究方案
一种提高膜片钳实验效率的方法与流程:膜片钳技术是一种记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜上离子通道分子活动的技术。是用来研究单个离体的活细胞、组织切片或细胞膜片离子流的电生理实验技术。这项技术在可兴奋细胞如神经元、心肌细胞、肌纤维和胰腺细胞的研究中起至关重要的作用,也可用于研究特殊制备的巨型球状体中的细菌离子通道。传统膜片钳技术对实验人员的技术要求非常高,一般地,实验人员需要经过严格的长期的训练,才能准确且快速的操作。金华药理学膜片钳电生理技术研究方案
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