合肥郑州鼠尾胶原

鼠尾胶原：鼠尾胶原是一种天然培养基和一种天然的黏附剂。实验设备及材料：大鼠尾巴、剪刀、镊子、止血钳、弯头吸管、平皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、天平、生理盐水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、盖玻片、培养瓶、钻石笔、鼠尾胶原。实验内容：1、制备鼠尾胶原（两个同学一组操作）。2、切割小玻片。3、利用鼠尾胶原将小玻片固定于培养瓶内。制备鼠尾胶原：1、取大鼠尾巴洗净，75%酒精浸泡5分钟；2、手持尾巴，用止血钳夹住鼠尾的，折断尾骨后拉出尾腱；3、将尾腱剪断置于平皿中，生理盐水浸泡；4、重复步骤2、3，直至尾腱量够用；5、吸去生理盐水，将尾腱称重（0.5-1克）；6、将尾腱置于平皿内剪碎，转移至三角烧瓶中；7、按每克尾腱50ml的比例，加入0.1%醋酸溶液；8、摇晃，使尾腱分散于醋酸溶液中，4℃放置一星期；9、离心，4000转/分，10-15分钟；10、吸取上清，分装成小瓶，4℃保存。方法制作鼠尾胶原，观察全细胞膜片钳实验中，自制的鼠尾胶原对前庭毛细胞的贴壁黏附作用。合肥郑州鼠尾胶原

胶原蛋白的提取方法：酸法提取：酸法提取主要采用低离子浓度酸性条件浸渍处理原料，从而破坏分子间的盐键和希夫碱，而引起纤维膨胀、溶解。作为溶剂使用的酸，主要有盐酸或亚硫酸、磷酸、硫酸、醋酸、柠檬酸和甲酸等。酸法是提取胶原蛋白比较常用和有效的方法，用酸法提取的胶原较大程度地保持了其三股螺旋结构。此法处理快速，所得产品的分子量是连续的，适用于医用生物材料及原料的制备，但产品得率低，设备腐蚀严重，污染重。赵苍碧等[2]采用0.3%的醋酸溶液在4℃下从牛腱中提取胶原蛋白，得到高纯度的胶原蛋白溶液。金华广州鼠尾胶原前庭毛细胞贴附于培养皿底壁，易于封接和长时间（约8h)的观察和记录。

鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用说明：不含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100ul10×PBS或10×培养液，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。

细胞培养过程中，细胞需要贴附在培养皿表面（悬浮培养细胞除外）才能完成生长过程，而有一些细胞却总是不太给力，自己完成不了贴壁过程或者贴壁困难，这个时候鼠尾胶原蛋白就能承担起让细胞更容易贴壁的作用。这一步也被称作涂层（coating），给培养皿涂上了一层胶原蛋白后，细胞就能更好地贴附上去，除了培养皿，一些需要使用海藻碳酸钙微球培养得细胞，同样也可以用鼠尾胶原蛋白协助细胞贴壁生长。耗子尾汁还能变得更加，一种被称作鼠尾胶原蛋白的“珍贵”液体就来自大鼠的尾巴，制作过程需要经历醋酸抽提整个操作请于冰上进行，因室温下鼠尾胶原I可迅速成胶。

胶原蛋白占人体蛋白质总量的三分之一，不论来源于哪一种动物或哪一种组织的胶原都有许多共同特性。胶原蛋白可分为20几个亚型，但为常见的为I、II、III型胶原蛋白，即间质胶原蛋白。其中I型为丰富且品质优良。划重点：任何动物的胶原都有许多共性，I型胶原蛋白为丰富且品质优良，鼠尾胶原蛋白是I型胶原蛋白。于是，动物中心就进行了有关“耗子尾汁”的发明：一种基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料及其制备方法并在说明书中给出了原因：“一般的生物体中提取的胶原蛋白多为混合型，之前多从牛皮、猪皮、牛腱中提取，但这类胶原蛋白不仅有油脂等其他杂质，制备鼠尾胶原：重复步骤2、3，直至尾腱量够用。太原鼠尾胶原厂家直销

注意事项：在室温下pH 中性时可迅速成胶，在操作过程中要 尽量保持低温。合肥郑州鼠尾胶原

酸解提取鼠尾Ⅰ型胶原及相对分子质量和浓度检测鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下，其腱性组织被水解成胶冻状溶液，从而分解成鼠尾Ⅰ型胶原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型胶原150μL滴在薄膜上，可形成液滴状胶原蛋白凝胶(，其生物力学强度极差，一碰即散。将鼠尾胶原蛋白进行SDS-PAGE，结果显示：Ⅰ型胶原蛋白原液在相对分子质量130000附近有明显条带，另一条带的相对分子质量大于170000(图2)。胶原蛋白浓度为1.8mg/mL。吸取矿化液倒入小培养皿中，将鼠尾Ⅰ型胶原纤维浸泡在矿化液中。矿化2、6d后，分别将矿化后的Ⅰ型胶原纤维进行TEM和电子衍射观察。合肥郑州鼠尾胶原