无菌检查的阳性对照菌液，如何制备标准浓度？保存多久？

南京乐诊生物技术有限公司2026-03-06

无菌检查阳性对照菌悬液需确保浓度准确（10-100 CFU/mL）且活性稳定，这是判断实验有效性的关键。菌株选择：硫乙醇酸盐流体培养基（FTM）使用生孢梭菌CMCC(B)64941，胰酪大豆胨液体培养基（TSB）使用金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003。制备流程：1. 复苏与培养：从工作种子批复苏菌株，生孢梭菌需在厌氧条件下培养48-72小时，金黄色葡萄球菌需氧培养18-24小时，至对数生长期。2. 浊度调整：用无菌生理盐水或pH 7.0缓冲液将菌液稀释至0.5麦氏浊度（约1.5×10⁸ CFU/mL）。3. 梯度稀释：进行10倍系列稀释至10⁻⁶。4. 平板计数：取10⁻⁵、10⁻⁶、10⁻⁷三个稀释度各0.1mL涂布TSA平板，每个稀释度3个平行，适宜温度培养计数。5. 浓度计算：根据平板菌落数计算原液浓度，稀释至目标浓度（10-100 CFU/mL）。6. 即时验证：取0.1mL稀释好的菌液涂布平板，确认实际菌落数在10-100 CFU范围内。保存与使用：制备好的菌悬液应在2小时内使用；若需短期保存，2-8℃不超过24小时，使用前需重新计数验证。不可冷冻保存，反复冻融会导致菌体死亡。即用型替代方案：南京乐诊提供即用型阳性对照菌珠，每支含预标定浓度（50 CFU±30%）的冻干活菌，直接溶解后即可使用，避免自行制备的繁琐和误差。每支菌珠为单次使用量，确保浓度准确、活性稳定。无论采用何种方法，每次实验都需设置阳性对照，培养后应出现明显生长，否则实验无效。