标准菌株冻存后，反复冻融对其性状和活力有哪些影响？

南京乐诊生物技术有限公司2026-04-09

实验室保存南京乐诊标准菌株时，反复冻融是常见的操作误区，很多客户不清楚其对菌株性状和活力的影响，导致菌株退化、实验结果偏差，结合乐诊菌株的特性，详细说明反复冻融的具体影响及应对方法，帮助客户规范保存，减少菌株损耗。首先，反复冻融对菌株活力的严重影响，乐诊标准菌株冻存时，菌体处于休眠状态，冻融过程中，细胞内水分会形成冰晶，反复冻融会导致冰晶不断形成和融化，刺破菌体细胞膜，破坏细胞结构，导致菌体死亡，活力大幅下降。具体表现为：复苏后菌株生长缓慢、菌落细小、数量减少，甚至无法复苏；对于芽孢类菌株，反复冻融会破坏芽孢结构，降低芽孢萌发率，导致菌株无法正常生长繁殖。一般来说，乐诊标准菌株反复冻融超过3次，活力会下降50%以上，无法满足实验和质控要求，若冻融次数超过5次，菌株基本丧失活力，需彻底废弃。其次，反复冻融对菌株性状的影响，反复冻融不会降低活力，还会导致菌株遗传性状发生改变，出现生化反应异常、菌落形态变异、染色特性改变等问题。例如，原本能正常发酵葡萄糖的菌株，反复冻融后可能失去发酵能力；原本菌落为圆形、光滑的菌株，可能变为不规则、粗糙的菌落；革兰氏阳性菌可能出现染色不稳定，误判为革兰氏阴性菌，这些性状改变会导致实验结果失真，无法作为标准参考菌株使用。此外，反复冻融还会增加菌株污染的风险，每次冻融都需要开启冻存管，空气、操作器具中的杂菌可能进入管内，导致菌株污染，污染后的菌株无法用于实验，只能废弃，造成耗材浪费。针对以上影响，客户需采取针对性措施，避免反复冻融：一是采用“分装冻存”方式，将复苏后的乐诊标准菌株分成多支小剂量冻存管，每支用于一次实验，使用后不再冻存，从源头避免反复冻融；二是严格控制冻融速度，冻存时采用梯度降温（4℃ 30分钟→-20℃ 1小时→-80℃长期保存），复苏时将冻存管放入37℃水浴锅中快速融化（1-2分钟），减少冰晶形成对菌体的损伤；三是冻存管密封完好，避免冻融过程中空气进入或液体泄漏，同时做好标记，注明冻存日期、传代次数，优先使用冻存时间较短的菌株；四是长期保存的菌株，建议采用冻干保藏方式，相比液氮冻存，冻干菌株更稳定，可减少冻融次数，延长保存时间。乐诊标准菌株本身活力稳定、性状优良，只要避免反复冻融，规范保存，就能长期保持其原始特性，满足实验室实验和质控需求。