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Recombinant Human GPRC5D Protein-VLP

来源: 发布时间:2025年03月08日

dNTP/dUTPMixture(2.5mMeach/5mM):助力分子生物学实验的高效防污染解决方案在分子生物学实验中,PCR技术是基因扩增和检测的工具之一。然而,PCR产物的残留污染可能导致假阳性结果,严重影响实验的准确性和可靠性。dNTP/dUTPMixture(2.5mMeach/5mM)作为一种高效的防污染试剂,通过与尿嘧啶DNA糖苷酶(UDG)联合使用,能够有效解决这一问题。产品特点高纯度与稳定性dNTP/dUTPMixture(2.5mMeach/5mM)采用高纯度的dATP、dCTP、dGTP和dUTP,纯度≥99%,确保实验的准确性和重复性。该产品在-20℃下可稳定保存24个月,使用时需避免反复冻融。防污染机制该产品通过在PCR反应中用dUTP替代dTTP,使扩增产物中掺入dU碱基。随后,UDG酶能够特异性地降解含有dU的DNA产物,从而有效去除残留的PCR产物污染。这种防污染系统特别适用于高通量PCR实验和需要严格控制假阳性的应用场景。兼容性与适用性dNTP/dUTPMixture适用于多种DNA聚合酶,如Taq酶和BstDNA聚合酶等,可用于PCR、real-timePCR、RT-PCR、引物延伸反应以及cDNA合成等多种分子生物学实验。然而,需要注意的是,某些具有校正活性的酶可能不适用于该混合物,具体需参考酶的产品说明书。Cas12a不仅具有顺式切割活性,还具备独特的反式切割活性,这使得它能够无差别地裂解附近的单链DNA。Recombinant Human GPRC5D Protein-VLP

Recombinant Human GPRC5D Protein-VLP,标准物质

Lambda核酸外切酶(λExonuclease)在PCR产物的克隆中主要应用在以下几个方面:1.**单链DNA的生成**:-Lambda核酸外切酶可以用于从双链DNA中生成单链DNA。由于该酶沿5'→3'方向逐步切去5'单核苷酸,底物是5'磷酸化的双链DNA,因此可以用来消化PCR产物中的一条链,从而生成单链DNA,这对于某些克隆技术来说是必要的步骤。2.**PCR产物的克隆**:-在克隆过程中,有时需要将PCR产物的5'端磷酸化,以便与载体连接。Lambda核酸外切酶可以消化非磷酸化的DNA,从而在一定程度上帮助准备适合克隆的PCR产物。3.**减少自身环化和非特异性连接**:-在连接反应中,为了减少质粒载体的自身环化,可以使用碱性磷酸酶处理质粒DNA以去除5'磷酸基团。而Lambda核酸外切酶可以消化5'端磷酸化的DNA,因此在某些情况下,它可以辅助减少PCR产物的自身环化,尤其是在PCR产物和质粒载体的连接反应中。4.**提高克隆效率**:-通过消化PCR产物中的一条链,Lambda核酸外切酶可以帮助减少PCR产物的非特异性连接,从而提高克隆的效率和准确性。综上所述,Lambda核酸外切酶在PCR产物的克隆中主要通过生成单链DNA、准备适合克隆的PCR产物、减少自身环化和非特异性连接以及提高克隆效率等方面发挥作用。Recombinant Human GPRC5D Protein-VLP泛素连接酶E3识别特定的靶蛋白,并促进E2上的泛素转移到靶蛋白的赖氨酸残基上,形成泛素化标记。

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在分子生物学研究中,核酸染料是检测DNA和RNA的重要工具。然而,传统的溴化乙锭(EB)染料因其剧毒性和致,逐渐被更安全的替代品所取代。GoldenView 吖啶橙核酸染料作为一种新型的核酸染料,凭借其性能和安全性,成为科研工作者的理想选择。GoldenView 吖啶橙核酸染料的成分是吖啶橙,这是一种细胞渗透性荧光染料,能够与核酸结合并发出荧光信号。其独特的荧光特性使其在检测双链DNA(dsDNA)时呈现绿色荧光(530 nm),而在与单链DNA(ssDNA)或RNA结合时则发出红色荧光(640 nm)。这种双重荧光特性不仅提高了检测的灵敏度,还为研究人员提供了更丰富的信息。在琼脂糖凝胶电泳中,GoldenView 吖啶橙核酸染料表现出与EB相当的灵敏度,能够清晰地检测到大片段(>1 kb)的DNA。此外,该染料的使用方法与EB完全相同,无需改变现有的实验流程,即可轻松替换传统染料。安全性是GoldenView 吖啶橙核酸染料的另一大优势。与EB不同,GoldenView 经过多项致突变性试验验证,结果均为阴性,表明其对细胞和环境更为安全。这种低毒性特性使其在实验室中使用更为便捷,同时降低了对研究人员健康的潜在风险。

T5核酸外切酶在基因克隆中的优势主要体现在以下几个方面:1.**高效性**:T5核酸外切酶依赖性组装(TEDA)方法在常规克隆中的效率与使用专有DNA聚合酶的商业In-Fusion方法相似,但高于使用T5核酸外切酶、PhusionDNA聚合酶和DNA连接酶的Gibson方法。2.**低成本**:TEDA方法每个反应使用0.04U的T5核酸外切酶,价格为0.25美分,具有很高的成本效益。3.**简单性**:TEDA方法的反应混合物非常简单,易于操作,这使得它在预算有限的实验室中尤其有用。4.**灵活性**:TEDA方法能够组装多个DNA片段,并在多个位点同时进行定点诱变,提供了一种灵活的克隆和突变方法。5.**阳性克隆率**:使用T5核酸外切酶的无缝克隆技术可以确保100%的阳性克隆率,这提高了实验的成功率。6.**协同作用**:在无缝克隆中,T5核酸外切酶与Phusion高保真DNA聚合酶和TaqDNA连接酶协同作用,通过切割、填补和连接三个步骤,高效地完成DNA片段的连接。7.**减少污染**:T5核酸外切酶可以降解碱裂解提取质粒中的变性DNA,减少超螺旋DNA的污染,提高DNA克隆和转染效率。这些优势使得T5核酸外切酶成为基因克隆中一个非常有价值的工具,尤其是在需要高效、低成本和操作简便的实验环境中。来源于 Thermococcus kodakaraensis,具有高热稳定性和校正能力,适用于长片段PCR和热启动PCR。

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T5核酸外切酶在基因编辑中确实有应用,并且具有一些优势:1.**提高编辑效率**:根据一篇研究文章,T5核酸外切酶可以与CRISPR/Cas系统共表达或融合,以提高基因编辑的效率。这种共表达或融合可以增加indel(插入和缺失)频率,尽管增加的幅度可能不大。2.**增强基因编辑效果**:在另一项研究中,通过使用螺旋-螺旋二聚体肽(coiled-coilpeptides)将T5核酸外切酶招募到Cas9或Cas12a蛋白上,可以提高基因编辑的效率,这种方法被称为CCExo(CRISPR-Coiled-coil-Exonuclease)。这种招募方式优于共表达和直接融合,其中强的亲和力CC对显示出高的突变频率和删除长度。3.**应用于多种细胞类型**:CCExo系统在多种细胞系和原代细胞中都能有效地提高基因失活效率,并且在慢性髓性白血病(CML)患者的原代细胞以及异种移植动物模型中展示了其应用潜力,这表明CCExo方法可能成为CML和其他遗传性疾病的潜在选择。T5核酸外切酶与CRISPR核酸酶蛋白进行融合,并引入了核定位信号(NLS)序列以构建表达载体,用于基因编辑。综上所述,T5核酸外切酶在基因编辑中的应用可以增强编辑效率和效果,尤其是在与CRISPR/Cas系统结合使用时。蛋白在表达过程中形成包涵体,需要通过复性步骤恢复其活性。这通常涉及物质的存在下进行蛋白质的重折叠。Recombinant Human GPRC5D Protein-VLP

Cas9 NLS可用于体外实验中筛选能够高效引导Cas9蛋白进行DNA剪切的gRNA序列 。Recombinant Human GPRC5D Protein-VLP

产品特点高灵敏度与特异性SYBRGreen是一种荧光染料,能够特异性地结合到双链DNA的小沟区域。在qPCR过程中,随着DNA链的延伸,SYBRGreen的荧光信号不断增强,从而实现对目标基因的实时定量。这种染料的结合特异性极高,确保了实验结果的准确性。即使在低浓度的模板条件下,也能检测到目标基因的存在,灵敏度可达单拷贝水平。2×预混体系,操作简便该产品采用2×预混体系,预先将Taq酶、dNTPs、MgCl₂等关键组分混合均匀,实验人员需加入引物和模板即可进行反应。这种预混体系简化了实验操作步骤,减少了人为误差,同时保证了反应体系的均一性和稳定性。无论是初学者还是经验丰富的研究人员,都能轻松上手,快速开展实验。低ROX参比染料,减少背景干扰ROX染料作为qPCR反应中的参比染料,用于校正孔间荧光信号的差异。然而,过高的ROX浓度可能会引入背景荧光,影响实验结果的准确性。SYBRGreenqPCRMix(2×,LowROX)采用了低浓度的ROX染料,有效降低了背景干扰,提高了荧光信号的信噪比,使得定量结果更加精确可靠。Recombinant Human GPRC5D Protein-VLP