Cre重组酶在基因编辑中的操作主要涉及以下几个步骤:1.**识别与结合**:-Cre重组酶首先识别并分别结合两个LoxP序列的两个反向重复序列,形成一个二聚体。2.**四聚体形成**:-两个二聚体互相靠近,形成由四个Cre分子与两个LoxP位点结合形成的四聚体复合物。3.**DNA切割与交换**:-Cre重组酶在每个LoxP位点的间隔序列中引导单链切割,产生带有3’端羟基的断裂。每个LoxP位点的两个单链分别被切割。切割产生的自由3’端与对侧的3’端进行交换和重连,形成Holliday交叉结构。4.**分子重组与解旋**:-Holliday交叉结构通过Cre酶的作用被解旋并重组,形成新的重组产物。这个过程导致两个LoxP位点之间的DNA序列被删除、反转或易位,具体效果取决于LoxP序列的排列方式(方向和位置)。5.**条件性基因编辑**:-通过建立特异性Cre小鼠,该小鼠中的Cre重组酶由特定启动子驱动,可在特定细胞或组织或全身表达Cre重组酶。与带有Lox位点的Flox小鼠杂交,子代中可以获得既带有Cre又带有Flox基因的小鼠,实现条件性基因打靶(表达或敲除靶基因)。Endo H 是一种糖蛋白特异性的酶,主要作用于含有 N - 连接寡糖链的糖蛋白,对其他类型的生物大分子如核酸。Recombinant Mouse TRAIL/TNFSF10
Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease,简称λExonuclease)是一种具有特定特性和应用的酶,以下是其主要特点和应用:1.**特异性作用**:λExonuclease是一种5'→3'核酸外切酶,能选择性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的双链DNA。2.**酶切活性**:对单链DNA和5'端未磷酸化修饰的DNA的酶切活性较低,不能从DNA的切刻或缺口处起始消化。3.**嗜磷酸性**:该酶具有非常强的嗜磷酸性,磷酸化的核酸链与非磷酸化的核酸链的切割效率相差达200倍以上。4.**切割效率**:Lambda核酸外切酶是一种具有高度持续性的碱性核酸外切酶,可以连续地将核酸切割成为单个碱基,切割比较高速率可以达到1000nt/S。5.**应用领域**:-生成单链PCR产物用于DNA测序。-DNA单链构象多态性(SSCP)分析。-滚环扩增。-从双链DNA片段生成单链DNA。-PCR产物的克隆。-质粒制备净化。6.**酶活性定义**:Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtoproduce10nmolofacid-solubledeoxyribonucleotidefromdouble-strandedsubstrateinatotalreactionvolumeof50μlin30minutesat37ºCin1XLambdaExonucleaseReactionBufferwith1μgsonicatedduplex[3H]-DNA。Recombinant Mouse B7-H2/ICOSLG Protein,His TagFnCas12a在切割DNA时产生黏性末端,有助于提高同源定向修复(HDR)的效率。
T5核酸外切酶在基因克隆中的优势主要体现在以下几个方面:1.**高效性**:T5核酸外切酶依赖性组装(TEDA)方法在常规克隆中的效率与使用专有DNA聚合酶的商业In-Fusion方法相似,但高于使用T5核酸外切酶、PhusionDNA聚合酶和DNA连接酶的Gibson方法。2.**低成本**:TEDA方法每个反应使用0.04U的T5核酸外切酶,价格为0.25美分,具有很高的成本效益。3.**简单性**:TEDA方法的反应混合物非常简单,易于操作,这使得它在预算有限的实验室中尤其有用。4.**灵活性**:TEDA方法能够组装多个DNA片段,并在多个位点同时进行定点诱变,提供了一种灵活的克隆和突变方法。5.**阳性克隆率**:使用T5核酸外切酶的无缝克隆技术可以确保100%的阳性克隆率,这提高了实验的成功率。6.**协同作用**:在无缝克隆中,T5核酸外切酶与Phusion高保真DNA聚合酶和TaqDNA连接酶协同作用,通过切割、填补和连接三个步骤,高效地完成DNA片段的连接。7.**减少污染**:T5核酸外切酶可以降解碱裂解提取质粒中的变性DNA,减少超螺旋DNA的污染,提高DNA克隆和转染效率。这些优势使得T5核酸外切酶成为基因克隆中一个非常有价值的工具,尤其是在需要高效、低成本和操作简便的实验环境中。
在分子生物学研究中,核酸染料是检测DNA和RNA的重要工具。然而,传统的溴化乙锭(EB)染料因其剧毒性和致病,逐渐被更安全的替代品所取代。GoldenView 吖啶橙核酸染料作为一种新型的核酸染料,凭借其性能和安全性,成为科研工作者的理想选择。GoldenView 吖啶橙核酸染料的成分是吖啶橙,这是一种细胞渗透性荧光染料,能够与核酸结合并发出荧光信号。其独特的荧光特性使其在检测双链DNA(dsDNA)时呈现绿色荧光(530 nm),而在与单链DNA(ssDNA)或RNA结合时则发出红色荧光(640 nm)。这种双重荧光特性不仅提高了检测的灵敏度,还为研究人员提供了更丰富的信息。在琼脂糖凝胶电泳中,GoldenView 吖啶橙核酸染料表现出与EB相当的灵敏度,能够清晰地检测到大片段(>1 kb)的DNA。此外,该染料的使用方法与EB完全相同,无需改变现有的实验流程,即可轻松替换传统染料。安全性是GoldenView 吖啶橙核酸染料的另一大优势。与EB不同,GoldenView 经过多项致突变性试验验证,结果均为阴性,表明其对细胞和环境更为安全。这种低毒性特性使其在实验室中使用更为便捷,同时降低了对研究人员健康的潜在风险。Cas9 NLS与CRISPR/Cas9系统中的gRNA兼容,可以进行位点特异性的DNA切割 。
一、产品特点高纯度与稳定性dNTPSetSolution中的每种核苷酸(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)浓度均为100mM,纯度超过99%,经HPLC验证,无DNase和RNase污染。这种高纯度的dNTP溶液能够有效减少实验中的非特异性扩增,确保实验结果的准确性和重复性。独立包装与灵活使用该套装将四种dNTP分别独立包装,便于用户根据实验需求精确调整每种dNTP的浓度,从而优化反应条件。这种灵活性对于复杂的分子生物学实验尤为重要,例如多重PCR和高保真PCR。适用性dNTPSetSolution适用于多种分子生物学应用,包括但不限于PCR、实时荧光定量PCR、RT-PCR、cDNA合成和DNA标记。其超纯的成分和稳定的性能使其能够兼容各种DNA聚合酶,包括高保真酶和热启动酶。二、性能优势高效扩增在PCR反应中,dNTP的纯度和浓度直接影响扩增效率。dNTPSetSolution能够支持长达20kb的DNA片段扩增,表现出色的扩增能力和稳定性。此外,其高纯度特性可以减少非特异性产物的生成,提高实验的特异性和灵敏度。激发的泛素被转移到泛素结合酶E2的活性位点半胱氨酸残基上,形成E2-泛素硫酯中间体。Recombinant Human CD8 alpha/CD8A Protein,His Tag
在CRISPR-Cas9等基因编辑技术中,使用Pfu DNA Polymerase进行修复模板的合成。Recombinant Mouse TRAIL/TNFSF10
T7EndonucleaseI(T7EI)在CRISPR/Cas9基因编辑中的应用主要体现在突变体检测和基因编辑效率评估上。以下是T7EI在CRISPR/Cas9中的具体应用步骤和特点:1.**基因编辑效率评估**:-T7EI用于评估CRISPR-Cas9在给定的导向RNA靶位点上对细胞群体进行基因编辑的效率。-通过PCR扩增围绕CRISPR导向RNA靶位点的基因组DNA,如果CRISPR-Cas9介导的非同源末端连接(NHEJ)修复事件引入了突变,变性和退火将形成突变型和野生型PCR扩增子的异源双链DNA。2.**突变体检测**:-如果CRISPR/Cas9编辑成功在DNA上引入突变,则可与野生型DNA片段退火产生异质双链DNA。T7EI可以识别该DNA上的不完全配对的DNA位点然后进行双链切割,通过琼脂糖凝胶电泳即可显示酶切后的条带,从而半定量判定基因编辑效果。-T7EI能识别长度大于或等于2bp的插入、缺失或突变导致的错配DNA,不能识别1bp的插入、缺失或突变。3.**实验步骤**:-收集细胞并提取基因组DNA,然后使用PCR扩增期望编辑的基因组区域。扩增子的长度建议为0.5-1kb。-对扩增的DNA进行变性和退火复性,以产生异质双链DNA。-使用T7EI酶处理退火后的DNA产物,在37℃孵育15分钟。
Recombinant Human Kallikrein 3/PSAProtein
Recombinant Human CD58 Protein
Recombinant Human/Mouse/Rat Activin A Protein
Recombinant Mouse Glypican 1/GPC1 Protein
Recombinant Mouse TREM2 Protein
NP(118-126)
Recombinant Human RETN Protein
Recombinant Human CEACAM-7 Protein
毕赤酵母表达重组肠激酶
Pfu DNA Polymerase