在基因编辑中,除了NLS-Cas9-EGFPNuclease,还有多种技术可以提高编辑的特异性,这些技术包括:1.**高保真Cas9变体**:通过工程化改造Cas9蛋白,例如使用SpCas9-HF1或eSpCas9等高保真变体,可以减少脱靶效应,提高特异性。2.**碱基编辑器(BaseEditors)**:这类编辑器可以在不产生DNA双链断裂的情况下直接在特定位置进行单个碱基的转换,从而减少非目标编辑。3.**引导编辑器(PrimeEditors)**:由哈佛大学刘如谦教授团队开发的引导编辑器可以在不依赖DNA双链断裂和同源定向修复的情况下,实现精细的基因组编辑。4.**CRISPRi和CRISPRa**:这两种技术分别用于抑制或激起特定基因的表达,而不切割DNA,从而减少了脱靶风险。5.**新型CRISPR系统**:例如CRISPR/Cas12j和CRISPR/CasΦ,这些系统可能具有不同的PAM序列要求和更高的特异性。6.**AI辅助设计**:利用人工智能预测和优化sgRNA的设计,以减少脱靶效应。7.**优化递送系统**:改进CRISPR组分的递送方法,例如使用核糖核的蛋白(RNP)复合物,可以提高编辑效率和特异性。8.转座子编辑系统:利用转座子进行基因组编辑,可以在不依赖DNA双链断裂的情况下实现大片段DNA序列的插入。
N末端His标签的泛素蛋白(RecombinantHumanUbiquitinProteinTagged-HisTag,UB)是一种经过遗传工程改造,在其N末端融合了His标签的泛素蛋白。以下是这种蛋白的一些特点:1.**His标签**:N末端His标签是一种常见的融合标签,用于提高蛋白质的可溶性和便于通过亲和层析进行纯化。His标签通常由6到10个组氨酸(His)组成。2.**重组表达**:这种泛素蛋白通常在大肠杆菌(E.coli)或其他宿主细胞中通过重组DNA技术表达。3.**高度保守**:泛素蛋白是一个76个氨基酸残基的多肽,在真核生物中高度保守。4.**分子量**:由于N末端添加了His标签,重组泛素蛋白的分子量会略大于天然泛素(约8.5kDa)。5.**纯度**:重组泛素蛋白通常具有高纯度(>95%bySDS-PAGE),适合用于各种生物化学和分子生物学实验。6.**溶解性**:His标签的添加可以提高蛋白质在水溶液中的溶解性,便于实验操作。7.**稳定性**:冻干粉形式的重组泛素蛋白在-25~-15℃保存,具有较长的有效期,通常为一年。8.**应用广**:N末端His标签的泛素蛋白可用于多种实验,包括蛋白质泛素化、E3泛素连接酶活性测定、蛋白质相互作用研究等。Recombinant Human Amphiregulin泛素化蛋白随后被靶向到26S蛋白酶体进行降解,或出现蛋白位置或活性变化。
确保N末端His标签的泛素蛋白在实验中的活性和稳定性,需要考虑以下几个关键因素:1.**储存条件**:按照生产商的建议,将重组泛素蛋白冻干粉储存在-25~-15℃的条件下,以保持其稳定性和活性。2.**避免反复冻融**:多次冻融会降低蛋白质的稳定性和活性。建议在使用后将剩余的蛋白质分装并储存在推荐的条件下。3.**复溶条件**:按照产品说明,使用无菌蒸馏水或推荐的缓冲液将蛋白质复溶至适当的浓度。通常建议添加0.1%BSA以增加蛋白质的溶解度和稳定性。4.**使用前离心**:在使用前,将蛋白质溶液短暂离心,以确保所有组分都沉积在底部,避免取样时的不均匀性。5.**工作浓度和体积**:根据实验设计,将蛋白质稀释至工作浓度,并尽量使用小体积以减少蛋白质的降解。6.**避免蛋白降解**:在实验过程中,使用蛋白酶抑制剂以防止蛋白降解酶对重组泛素蛋白的降解。7.**避免氧化**:在蛋白质的储存和使用过程中,避免氧化,可以通过添加抗氧化剂如DTT或TCEP。8.**避免污染**:使用无菌技术操作,确保实验器材和环境的清洁,避免微生物污染。9.**操作环境**:在4℃或冰上进行操作,以减少蛋白质降解和非特异性相互作用。
确保重组EGFP(增强型绿色荧光蛋白)在实验中的稳定性和活性,可以采取以下措施:1.**适当的储存条件**:重组EGFP通常以冻干粉形式提供,应在-20°C至-80°C的低温条件下储存,以保持其稳定性。避免反复冻融,因为这可能导致蛋白质结构的破坏和活性的丧失。2.**正确的复溶方法**:在无菌条件下,使用推荐的溶剂(通常是无菌去离子水或适当的缓冲液)复溶EGFP,并避免使用含有蛋白酶或氧化剂的溶液。3.**避免光照**:EGFP对光照敏感,尤其是在紫外和蓝光下。在处理和储存时应避光,使用遮光容器或在低光照条件下操作。4.**使用保护剂**:在某些情况下,添加蛋白稳定剂(如甘油、蔗糖或BSA)可以提高EGFP的稳定性。5.**避免极端pH**:EGFP的活性和稳定性可能受到pH值的影响。在实验中使用接近其等电点pH值的缓冲系统,通常是中性或略偏碱性的条件。6.**控制温度**:避免将EGFP暴露在极端温度下,尤其是在高温条件下,因为这可能导致蛋白质变性。7.**避免物理剪切力**:在操作过程中,避免剧烈搅拌或超声处理,因为这些可能会导致蛋白质结构的破坏。Ultra-Long Master Mix 在分子生物学实验中的应用主要集中在需要扩增长片段DNA序列的场合。
NLS-Cas9Nuclease是一种重组的化脓性链球菌Cas9蛋白,它在N端和C端都添加了核定位信号(NLS),这使得它能够更有效地进入细胞核并进行基因组编辑。这种蛋白与CRISPR/Cas9系统的引导RNA(gRNA)形成稳定的核糖核的蛋白(RNP)复合物,可以在进入细胞后立即定位到细胞核,从而诱导特定的DNA双链断裂,实现基因编辑。与传统的mRNA或质粒系统相比,使用NLS-Cas9Nuclease不需要转录和翻译过程,因此可以避免将外源DNA插入基因组的风险,这对于基因编辑尤其有用。NLS-Cas9Nuclease的特点包括:1.无DNA:系统不添加外部DNA,降低了插入外源DNA的风险。2.高切割效率:双NLS确保Cas9蛋白高效进入细胞核。3.低脱靶效应:Cas9核酸酶的瞬时表达提高了切割的特异性。4.节省时间:无需转录和翻译过程。这种核酸酶可以用于体外DNA切割筛选高效和特异性靶向gRNA,以及通过电穿孔或注射与特定gRNA结合时的体内基因编辑。产品的保存条件通常是在-25~-15℃,有效期为一年。使用时,可以根据推荐的反应体系进行体外DNA裂解实验,并通过琼脂糖凝胶电泳检测消化效率。具体产品的详细信息和应用指南,可以参考金斯瑞生物科技有限公司、NEB、金斯瑞、YEASEN和Novoprotein等公司提供的资料。UBE2L3与其他E2酶的区别在于它具有特定的结构特征,它包含一个高度保守的UBC结构域,这是E2酶家族的标志。Recombinant Mouse LRRC15/LIB Protein,His Tag
UBE2L3在调节NF-κB信号通路中的作用可能对免疫反应和炎症过程至关重要。Recombinant Mouse Hepcidin/HAMP Protein,GST Tag
EndoS,即糖苷内切酶S(Endo-S),是一种具有高度特异性的酶,它在生物化学研究中有着重要应用,尤其是在糖蛋白和抗体药物偶联物(ADCs)的研究中。以下是EndoS的一些关键特点:1.**特异性**:EndoS能够特异性地识别并切割N-连接糖链的壳二糖结构,即在N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺之间的连接处进行切割。2.**应用**:在制备糖链定点ADC化合物中,EndoS被用于将小分子细胞毒药物“一步”定点连接到抗体糖基化位点,提供了一种重要的技术方法。3.**兼容性**:EndoS对多样化的LacNAc修饰显示出良好的兼容性,可以接受不同生物正交基团、荧光基团等衍生物作为底物,实现抗体糖基化修饰。4.**活性**:EndoS的活性对多肽没有严格的要求,可以接受蛋白质、肽、天门冬酰胺或游离聚糖作为底物。但是,对于具有三、四个支链的唾液酸化及去唾液酸化的聚糖,EndoS没有活性。5.**产品形式**:EndoS通常以带有His标签的形式存在,便于从反应中去除,这在实验操作中提供了便利。6.**研究进展**:EndoS在去糖基化方法研究中是一个重要的工具,特别是在研究糖蛋白的多肽部分和多糖部分的结构和功能时。
Recombinant Cynomolgus PS20 Protein
T7 RNA聚合酶(高浓度)
Recombinant Mouse ECSCR Protein
Recombinant Human HMGB1(His Tag)
Biotinylated Recombinant Human 4-1BB/TNFRSF9 (His-Avi Tag)
Recombinant Human Kallikrein 3/PSAProtein
Recombinant Human CD58 Protein
Recombinant Human/Mouse/Rat Activin A Protein
Recombinant Mouse Glypican 1/GPC1 Protein
Recombinant Mouse TREM2 Protein