干粉培养基是指干燥形态的培养基,通常需要加入适量的水或其他溶液以制成使用液体。干粉培养基通常包括可溶性和不溶性成分两种。其中可溶性成分为微生物和细菌等生物的生长提供必要的营养,而不溶性成分则为细胞提供支撑和保护作用。常见的干粉培养基包括TrypticSoyBroth(TSB)培养基、LB培养基、NutrientBroth(NB)培养基等。这些培养基通常需要在pH7.0-7.4之间保持稳定的酸碱度,并在适宜的温度和湿度下保存以确保培养基的质量。液体培养基通常是以水为基础配制而成的,或加入适量的薄荷醇等物质以调节酸碱度和渗透压等。与干粉培养基不同的是,液体培养基通常较少使用不溶性物质,而是依赖于水的流动性和原生质体膜的稳定性。液体培养基制备起来相对容易,且通常不需要使用过多的手段和工具即可获得较好的培养基。常见的液体培养基包括TSB液体培养基、LB液体培养基、Hanks培养基等。培养基还可以根据所需生长的微生物类别,加入特定的营养物质,例如血清、血红蛋白等等。LB肉汤(Miller)
细菌培养基之牛肉膏琼脂培养基:牛肉膏0.3g ,蛋白胨1.0g,氯化钠0.5g,琼脂1.5g,水100ml在烧杯内加水100ml,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2-7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌:1.05千克每平方厘米、121摄氏度维持15-30分钟。牛心培养基:取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。LB肉汤(Miller)培养基根据功能分为选择性培养基、区分性培养基、富集培养基等。
干粉培养基的保存和注意事项:干粉培养基的储存条件应保持干燥、防潮、防晒,并存放于阴凉干燥处,避免受到光线、温度、湿度等外界环境的影响。一旦开封,干粉培养基应立即密封并放回原包装中,以免受到环境中的污染和变质。在使用干粉培养基时,应注意其有效期和使用方法。有效期是指干粉培养基在储存条件下能够保持理想品质的时间,一般为 2 年至数年不等。在该期限内使用的干粉培养基能够保证培养实验的有效性和可重复性。同时,使用干粉培养基时应遵循无菌操作的原则,注意消毒、净化和防止污染,保证实验结果的准确和可靠。
培养基的使用方法:
培养基是在实验室中用于生物体(如细菌、细胞、***或植物)生长和繁殖的营养物质。不同类型的生物体需要特定类型的培养基,因此在使用培养基之前,您需要了解您所研究的生物体的需求。下面是一般情况下使用培养基的一般步骤:准备培养基:根据您所研究的生物体的要求,准备适当类型的培养基。培养基可以购买现成的,也可以根据配方自己制备。消毒:将培养基通过滤器或高温高压灭菌,以确保培养基中没有其他微生物的污染。此步骤非常重要,以避免在培养过程中引入外来微生物。培养容器准备:将消毒过的培养基倒入适当的培养容器中,如琼脂培养皿、试管或培养瓶。根据需要,可以在培养容器中加入其他物质,如***或营养物质。接种生物体:将您想要培养的生物体转移到准备好的培养基中。这可以通过不同的方法实现,例如用铁环划过细菌培养物表面、将细胞悬浮液滴入培养基中等。确保在操作过程中保持无菌条件,以避免外来微生物的污染。培养条件:根据您所研究的生物体的要求,设置适当的培养条件,如温度、湿度和光照。将培养容器放置在合适的培养设备中,如恒温箱、培养箱或培养室中。培养观察:在适当的时间间隔内观察培养基中的生物体生长情况。 培养基种类繁多,根据需求选择适合的培养基对于成功的微生物培养至关重要。
什么培养基中可以省去加酚红?酚红在培养基中用作pH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。酚红本身对生物制品质量并不会产生影响,可以通过纯化技术去除,但酚红在无血清培养基可能带来胞内钠/钾失衡,影响细胞生长,当然这种作用能被血清所中和或减轻。酚红并不是培养基中必需的一种成分,很多国外的疫苗或抗体生产企业在生产过程中都使用无酚红培养基。研究表明,酚红可以模拟固醇类的作用。为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基。无机盐类培养基包括霍普克因、潜水组分等,主要用于高盐菌的培养。LB肉汤(Miller)
大多数微生物可以使用富含营养的复合培养基快速生长,但有些微生物需要特定配方的培养基。LB肉汤(Miller)
对于已经购买来的预装培养基,其内部较初的状态已经是无菌的。因此,在通常情况下,我们不需要对新的预装培养基进行任何形式的消毒处理。只需要在使用之前,检查预装培养基瓶口是否无菌,便可以直接使用。在使用过程中,应当严格遵守实验室操作规范,避免外界微生物的污染。对于需要自制的培养基而言,其情况也不尽相同。如果自制的培养基中包含天然成分,那么在自制之后就需要进行消毒处理,以杀死培养基中可能存在的微生物。在消毒处理之后,再将培养基装入瓶中,就可以进行进一步的实验使用。同时,在使用自制的预装培养基时,需要严格控制其培养温度、培养时间、以及实验环境等参数,以保证实验结果的准确性。LB肉汤(Miller)
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