下层琼脂

培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。大多数细菌都能在富含有机物的基质中繁殖生长，因此有机培养基是基本的培养基之一。下层琼脂

还有一些鉴别性培养基，是利用细菌特有的各种酶系统，能分解利用各种特定的糖、醇、氨基酸或其他基质而产酸、产气、产碱或产生其他可见物质，依此进行细菌的鉴别，例如常用的生化培养基。用于细菌生化特性试验的培养基特点是在无糖的基础培养基中加人某种特定的基质，并加人指示剂，细菌在此类培养基中的一系列生化反应结果，均通过指示剂显示出来。此类培养基为生化反应鉴别培养基。根据用量又可分为常量生化培养基和微量生化培养基。值得注意的是生化试验培养基的某些成分受高温、pH等诸多因素的影响，在配制和使用时，应根据实际情况严格掌握，防止有效成分被破坏，以保障其使用效果。改良TGC流体培养基(无指示剂) 日本常用的培养基中添加的基本营养物质包括碳源、氮源、磷酸盐、有机物、无机盐和微量元素。

培养基中谷氨酰胺作用及使用方法？几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20℃ 冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基 4℃冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽，是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的 alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I 二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有较小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。

按培养基的营养成分是否完全区分：1.基本培养基，亦称“较低限度培养基”。只能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，称为基本培养基，是含有营养要求较低成分的合成培养基，常用“[-]”表示。这种培养基往往缺少某些生长因子，所以经过诱变过的营养缺陷型菌株不能生长。2.完全培养基，基础培养基添加血清等物质后，叫完全培养基，也叫（血清）细胞培养基。完全培养基可用来满足微生物的各种营养缺陷型菌株的生长需要，常以“[+]”表示。3.补充培养基，凡是只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组合培养基，称为补充培养基，它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成的。根据在基本培养基中加入的是A或B等营养因子代谢物而分别用[A]或[B]等来表示。培养基种类繁多，根据需求选择适合的培养基对于成功的微生物培养至关重要。

培养基按成分分类有哪些？按形态分类：培养基按其不同的物理状态，可分为液体、流体、半固体和固体4类，培养基的物理状态取决于培养基中是否加人凝固剂或凝固剂的加入量。1、液体培养基(liquidnutrientmedium)不加任何凝固剂，常温下以完全液态存在的培养基，如肉汤培养基或一般液体增菌培养基。2、流体培养基(semi-liquidmedium)在液体培养基中加入0.05%~0.1%的琼脂粉，使其具一定黏度，即成流体培养基。加入琼脂粉增加了培养基的黏度，降低空气中的氧气进人培养基的速度，能使培养基保持较长时间的厌氧条件，有利于一般厌氧菌的生长繁殖，如硫乙醇酸盐培养基、改良马丁培养基等。一般用于霉菌和厌氧菌检查的液体培养基中可加人少量琼脂使其成为流体培养。生长细胞需要的营养物质包括碳源、氮源、微量元素和维生素等。球毛壳霉琼脂

培养基是细胞和微生物生长所需的基本营养物质和环境条件。下层琼脂

在培养基中加人某种抑制剂和指示剂，抑制某些细菌生长，促进目的菌的繁殖，并使所生长的细菌菌落具有一定特征，以助鉴别挑选，这类培养基称为选择性鉴别培养基。如SS琼脂，在该培养基配方中含有乳糖(反应底物)、中性红和柠檬酸铁铵(指示剂)、灿烂绿及胆盐等(抑菌剂)。灿烂绿和胆盐等抑菌剂能抑制革兰氏阳性菌及部分大肠埃希菌的生长，而对沙门菌及志贺菌基本无影响，而且大肠埃希菌能发酵乳糖产酸，使菌落变红色，沙门菌和志贺菌不发酵乳糖，其菌落为无色。如细菌产生硫化氢，则与柠檬酸铁铵反应生成硫化亚铁沉淀，菌落中心呈黑色或褐色。以此达到鉴别的目的。下层琼脂

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