菌种储备用琼脂培养基

鉴别培养基(differential media) 在培养基中加入某一反应底物和指示剂，以区别某些微生物的特性从而鉴别之。又分一般鉴别培养基和选择性鉴别培养基。只用于区别不同微生物种类的培养基称为-般鉴别培养基，此类培养基中一般不加抑菌剂而只含指示剂，如克氏双糖铁培养基，含有葡萄糖及乳糖，以酚红作为指示剂，观察培养基底层与斜面的颜色变化判定细菌对葡萄糖和乳糖的发酵能力，加人柠檬酸铁铵，培养后观察是否产生黑色沉着以判定细菌是否分解蛋白胨中的含硫氨基酸而产生硫化氢；又如伊红-美蓝琼脂，含有乳糖(反应底物)、伊红-美蓝(指示剂)用以鉴别大肠埃希菌、肠道病原菌和其他杂菌。一般鉴别培养基的特点是在配方中都含有指示剂，并可用于区别不同种类的微生物，有些鉴别培养基也可同时作为细菌的特殊需要用来分离培养某些细菌，如胰酪胨大豆琼脂和巧克力色血琼脂。培养基的配方也会受到环境、药物和其他外部压力的影响，因此，在实际应用中需要不断进行调整和改进。菌种储备用琼脂培养基

近年来，国内外利用某些细菌特有的酶，选择相应的作用底物，研制出某些细菌专门用的的显色培养基，用于细菌的分离鉴别，收到了良好的效果，这种显色培养基实际上也是鉴别培养基。其基本原理是将色原(或荧光原)与细菌作用底物的结合物加于培养基中，当细菌含有相应酶时，使该结合物分解而显色(或显示荧光)。如色原糖苷结合物在糖苷酶作用下分解，使糖苷与色原分离，并显示颜色；荧光氨基酸结合物(不显荧光)在氨基肽酶作用下，使氨基酸与荧光物质分离而显示荧光。常用显色的色原有α-萘酚、β-萘酚、邻位硝基酚、对位硝基酚、对硝基苯胺、酚酞、2-氨基4-硝基苯等；常用的荧光物有4-甲基伞形酮(又称7-羟基4-甲基香豆素)等。目前，显色培养基已用于多种细菌的分离鉴别培养，如沙门菌、大肠埃希菌、李斯特菌、双歧杆菌和乳酸杆菌、白色念珠菌等显色培养基。麦芽提取物琼脂（MEA）液体培养基、固体培养基和半固态培养基是常用的培养基种类。

总体而言，所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源，但由于微生物营养类型复杂，不同微生物对营养物质的需求是不一样的，因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。自养型微生物能从简单的无机物合成自身需要的糖类、脂类、蛋白质、核酸、维生素等复杂的有机物，因此培养自养型微生物的培养基完全可以（或应该）由简单的无机物组成。例如，培养化能自养型的氧化硫硫杆菌（Thiobacillus thiooxdans）的培养基组成见表3.9。在该培养基配制过程中并未专门加入其他碳源物质，而是依靠空气中和溶于水中的CO2为氧化硫硫杆菌提供碳源。

细胞培养过程中，细胞培养基是不可或缺的，细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。通常细胞体外培养时需要加入血清，以维持细胞的生长和存活。而除了血清之外，部分细胞在培养过程中需要添加胰岛素和β-巯基乙醇（β-mercaptoethanol）等成分来维持细胞状态。MCF-7和NIH:OVCAR-3等细胞需要额外添加胰岛素，而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等细胞则需要添加β-巯基乙醇，不同细胞加入量会有差异，需根据细胞类型判断。培养基是一种营养物质混合物，可以为细胞提供生长所需的物质。

HBS 和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在 Eagle′s（2.2g/L） 中比在 Hanks′（0.35g/L）中高。碳酸氢钠需用高水平的 CO2 平衡，以维持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hanks′液在 CO2 培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagle′s液，如果只是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks′液就可以了。由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些。在配制培养用液时，需要注意一点：新配的培养基在经过 0.10um 或 0.22um 滤膜过滤时，溶液的pH 还会向上浮动0.2左右。培养基是细胞和微生物生长所需的基本营养物质和环境条件。NT培养基

人工合成基因可以在特定的培养基中得到表达，需要选择含有适当营养物质的培养基。菌种储备用琼脂培养基

培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。菌种储备用琼脂培养基

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