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铜绿假单胞杆菌冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜（DMSO）对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜（DMSO）选择进口产品。离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。离心问题目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，然后过段时间之后再进行换液。在土壤湿度15-30%时，铜绿假单胞菌可生长繁殖。铜绿假单胞菌一般情况下建议在20度以上的温度储存或者直接-80度冷冻储存。江苏CMCC(B)10104冻干粉供货价格

铜绿假单胞杆菌在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130摄氏度以下的低温中能减少冰晶的形成。细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞较容易受损的－5～0摄氏度，细胞仍能生长，活力受损不大目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。合适的铜绿假单胞杆菌温度通常在45～68摄氏度之间(预备实验可2摄氏度间隔进行)。另外，由于在60～68摄氏度间，也有很高的活性，因此可在此温度范围内设定铜绿假单胞杆菌温度，进行2StepPCR。铜绿假单胞杆菌温度为68摄氏度时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68摄氏度以下时，时间设定可稍长一些。浙江CMCC(B)10104斜面试管求购在铜绿假单胞菌培养基上呈蓝绿色或者红褐色菌落，365nm紫外灯下显荧光。

铜绿假单胞菌分解蛋白质能力甚强，而发酵糖类能力较低，分解葡萄糖，伯胶糖，单奶糖，甘露糖产酸不产气，不分解麦芽糖，菊糖和棉籽糖，甘露醇、乳糖及蔗糖，能液化明胶。分解尿素，不形成吲哚，氧化酶试验阳性，可利用枸椽酸盐。不产生H2S，MR试验和VP试验均为阴性。铜绿假单胞菌有菌体o抗原和鞭毛h抗原。一是o抗原含有内毒养素和原内毒养素蛋白质两种成份。原内毒养素蛋白质是一种高分子、低毒性，免疫原性强的保护性抗原，不只存在于不同血清型铜绿假单胞菌中，而且普遍存在于假单胞菌属的其他细菌以及肺炎杆菌、大肠杆菌、霍乱弧菌等g-细菌中，是一种良好的交叉保护抗原。二是脂多糖，与特异性有密切关系。

关于铜绿假单胞菌的干冰保存法一般为-70摄氏度左右，即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。液氮保存法一般为-196摄氏度，是适用范围较广的铜绿假单胞菌保存法。冷冻干燥保存法的原理是首先将铜绿假单胞菌冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分。从菌体中除去大部分水分后，细胞的生理活动就会停止，因此可以达到长期维持生命状态的目的。绿脓假单胞菌(绿脓杆菌)保存操作流程是，菌株复苏按三区划线法将留菌管内的原始菌株进行复苏，隐球菌除传显色培养基以外，另传1/2块血平皿上述菌株统一37摄氏度孵育48小时。菌种鉴定一般在48h后观察结果。保藏方法是传代培养。铜绿假单胞菌菌体的一端有单鞭毛，无芽胞，无荚膜。

铜绿假单胞菌通过吸附在病原真类菌的菌丝上，并随着菌丝生长而生长，产生溶菌物质消解菌丝体，使菌丝发生断裂、解体、细胞质消解，有的菌丝原生质凝结；或者是次生代谢产物对病原菌孢子的细胞壁产生溶解作用，致使细胞壁产生穿孔、畸形等现象。铜绿假单胞菌不但能直接抑制植物病原菌，而且能通过诱发植物自身的抗病潜能从而增强植物的抗病性。生防铜绿假单胞菌能促进植物根系及植株生长，增强植物的抗病性，从而间接地减少病害发生。铜绿假单胞菌发酵分为：固体发酵、液体发酵、固液混合发酵3种工艺。铜绿假单胞菌的菌体有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。江苏CMCC(B)10104甘油菌规格

铜绿假单胞菌存在的重要条件是潮湿的环境。江苏CMCC(B)10104冻干粉供货价格

铜绿假单胞杆菌离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。关于细胞贴壁少的问题，冻存细胞解冻时1毫升细胞液要加10毫升－15m培养液，而培养基越少细胞越容易贴附。复苏细胞分装的问题，试验中复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。江苏CMCC(B)10104冻干粉供货价格

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