无需染色纺锤体观察技术能够实时监测冷冻过程中纺锤体的形态变化,从而准确评估冷冻保存的效果。通过对比冷冻前后纺锤体的形态和稳定性,研究者可以优化冷冻保护剂的配方和浓度,以及改进冷冻程序,减少冷冻损伤,提高解冻后卵母细胞的存活率和发育潜能。解冻后的卵母细胞在无需染色的情况下,可以直接通过Polscope系统进行纺锤体观察。这一技术能够迅速评估解冻后卵母细胞的质量,包括纺锤体的形态、位置、稳定性等关键指标,为后续的受精和胚胎发育提供重要参考。纺锤体微管的数量和分布随细胞分裂阶段而变化。香港无损观察纺锤体兼容大部分显微镜
纺锤体生成在含中心体的细胞中,纺锤体的生成开始于细胞分裂前初期-即在细胞核膜分解(NuclearEnvelopeBreakdown,NEB)之前。初期的结构为两个**的以中心体为核的星状体(asters)。当细胞核膜分解后,染色体和星状体发生一系列复杂的互动反应。**终结果为所有的染色体在纺锤体的**(赤道板,)排列整齐,每两条染色体有一个着丝点,每一个着丝点被一束极性相同的微管(通常称为纺锤丝)附着。此时细胞处于分裂中期,纺锤体生成完毕。实验证明,中心体在这个过程中的作用不是必需的。动物细胞在中心体被激光捣毁后仍旧能够筑构纺锤体,但其位置通常不在细胞的大致几何中心,其后的胞质分裂也会受严重影响。纺锤体[1]在不含中心体的细胞中,纺锤体的生成是由染色体本身主导的。此过程由一小分子量的GTP连接蛋白(RanGTPase)控制。细胞核分解后,纺锤丝由染色体周围生成。其后这些纺锤丝会在动力分子与为微管动力的合作影响下自动排列为极性相反大致数目相同的两组。每组的极性相对于一组着丝点。同时在微管远端的动力蛋白dynein会将这些微管束集中到一点,形成纺锤极区(SpindlePolarZone)。与此同时,染色体会自动在赤道板排列整齐。纺锤体生成完毕。香港克隆纺锤体纺锤体的微管在细胞分裂后期会断裂并重新组装,形成新的细胞结构。
细胞生物学领域,纺锤体作为有丝分裂过程中的主要结构,发挥着至关重要的作用。它不仅确保了染色体的精确分离,还决定了胞质分裂的分裂面,从而保证了遗传信息的稳定传递和细胞增殖的准确性。纺锤体是一种在细胞分裂前期形成的临时性细胞器,由微管、微管结合蛋白以及多种调节蛋白组成。微管是纺锤体的主干,由α、β微管蛋白异源二聚体及少量微管结合蛋白聚合而成,呈现出动态生长和缩短的特性。在动物细胞中,纺锤体由星体微管、极间微管和动粒微管构成,这些微管在中心体的引导下,从两极向中心区域延伸,形成一个类似纺锤的形状。而在植物细胞中,纺锤体则是由细胞两极发出的纺锤丝直接构成,不含有星体微管,因此被称为无星纺锤体。
纺锤体观测仪使ICSI更加安全可靠在进行单精子卵胞浆内注射(ICSI)授精时,**初人们观察人体内成熟的卵母细胞时,通常认为,卵母细胞纺锤**于***极体附近,故传统的ICSI操作是转动卵母细胞使其***极**于6点或12点处,然后在3点处注入精子。但是,在大量使用纺锤体观测仪后发现,***极体并不能很好地预测纺锤体的位置。一项研究提示,在ICSI后,用纺锤体观测仪观察纺锤体与***极体的夹角,结果发现小于30°这组卵母细胞的正常受精率更高。极体在卵周隙中的移动,或者纺锤体在胞质中的易位都使两者的位置关系发生改变,普通光学显微镜下ICSI穿刺部位的选择,可能会损伤纺锤体和(或)造成染色体的异常。通过纺锤体观测仪,可以精确地对卵母细胞中纺锤体的位置进行定位,从而避免在ICSI过程中损伤纺锤体,使ICSI更加安全可靠。有文献报道,在进行ICSI时,观察到“双折射纺锤体”的成熟卵母细胞的受精率和质量胚胎率***高于未观察到双折射纺锤体组。也有学者发现,有些卵母细胞在普通光学显微镜下看到是正常的,但在纺锤体观测仪这个“照妖镜”下,就能显出原形,表现为有***极体、但缺乏双折射的纺锤体,这类卵母细胞ICSI后的受精率和妊娠率极低。纺锤体形成过程中的任何错误都可能影响细胞的命运。
卵母细胞的冷冻保存技术一直是研究的热点之一,特别是针对不同成熟阶段的卵母细胞,如MI期卵母细胞的冷冻保存。MI期卵母细胞具有独特的生物学特性和发育潜能,其纺锤体的稳定性和形态对于后续的受精和胚胎发育至关重要。因此,针对MI期纺锤体卵冷冻的研究不仅具有理论价值,更具有重要的临床应用前景。MI期卵母细胞的纺锤体由微管组成,这些微管结构精细且脆弱,容易受到冷冻过程中温度变化和渗透压变化的影响而发生损伤。纺锤体的损伤不仅会影响卵母细胞的正常发育,还可能导致受精失败或胚胎发育异常。纺锤体的异常可能与某些遗传性疾病的发病机制有关。香港克隆纺锤体
纺锤体微管网络的复杂性确保了细胞分裂的精确性和高效性。香港无损观察纺锤体兼容大部分显微镜
冷冻电镜技术(Cryo-EM)近年来在结构生物学领域取得了重大突破,也为纺锤体卵冷冻研究提供了新的视角。通过将生物样品冷冻至极低温并在电子显微镜下进行观察和成像,冷冻电镜能够揭示生物大分子的高分辨率结构,包括纺锤体微管等精细结构。这一技术不仅克服了传统电镜技术对样品制备的严格要求,还能够在接近生理状态下观察纺锤体的形态和功能,为无损观察纺锤体提供了强有力的技术支持。无损观察纺锤体技术能够实时监测冷冻过程中纺锤体的形态变化,从而准确评估冷冻保存的效果。通过对比冷冻前后纺锤体的形态和稳定性,研究者可以优化冷冻保护剂的配方和浓度,以及改进冷冻程序,减少冷冻损伤,提高解冻后卵母细胞的存活率和发育潜能。香港无损观察纺锤体兼容大部分显微镜