南京永诺数字PCR解决方案

        精细诊断是精细医学的关键环节，液体活检作为一种无创、均一的检测技术，迅速成为精细诊断领域的新星，2015年被《麻省理工大学科技评论》评选为年度**突破技术， 2017年入选世界经济论坛评出的全球**新兴技术，引发了全球科研、临床和产业界的极大热情，已在**、产前诊断、***移植等疾病领域***被应用。

       数字PCR技术与高通量的二代测序技术，共同组成液体活检领域的两大利器；数字PCR技术是公认的液体活检领域灵敏度比较高的检测方法，采用有限稀释的方法将目标分子分割到**的反应体系中，在不依赖标准曲线条件下实现靶标***定量检测，能检测低至0.01%的突变基因；Bio-Rad及Thermo Fisher目前是这一领域的主导者，分别采用微滴或芯片方式将样本分割成两万份，MiniDrop™创新性采用高压驱动的方法将样本分割成50万份，打破了国外厂商在微滴式数字PCR领域的垄断。

2个光电倍增管（PMT），灵敏度及增益优于MPCC或CCD。南京永诺数字PCR解决方案

       在定量PCR时，我们常常纠结一个问题，究竟是相对定量还是***定量呢？如今，你无需纠结了，因为数字PCR（digital PCR）来了。尽管这两种技术有些类似，都是估计起始样品中的核酸量，但它们有一个重要的区别。定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量，而数字PCR则让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的***定量。因此特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域：拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究（如等位基因不平衡表达）、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等。苏州广东数字PCR报价液体活检：早筛、用药、监测、复发。

研究方向

       低丰度及稀有序列的精确定量

       目前对于低丰度目标序列的检测，定量PCR、杂交、毛细管测序及NGS等方法都因受到背景DNA的干扰，使得检测灵敏度及精确性都达不到精细定量的要求(如定量PCR检测中Ct值大于33的情况下，其重复性就不是很高)， 而微滴式数字PCR系统通过**的微滴  化处理，使得稀有的核酸序列从大量的背景DNA中分离出来，从而提高了检测的灵敏度及重复性。

       此外，由于样品微滴化处理的同时，也将样品中可能存在的***剂进行了分装，提高了数字PCR扩增对于***剂的耐受程度，因此可具体应用于很多临床样品(血液、尿液、粪便、痰液、脑脊液等)中对**核酸标记物的检测。一般而言，毛细管电泳和定量PCR的检测灵敏度约在10%;NGS的灵敏度可达到1%;而ddPCR的检测下限为0.001%。

定量PCR和数字PCR的特点：

       5. 目前定量PCR已经能实现高通量样品条件下的自动化操作。   

       6. 数字PCR在单分子层面上的***定量，可以彻底摆脱对标准曲线的依赖而直接给出靶序列的拷贝数，提高了实验结果在批内和批间的稳定性，甚至能用来对标准品进行定标。   

       7. 基于***定量的方式，数字PCR结果的高重复性和高精度可实现微小差异的基因表达分析，如等位基因的不平衡表达、单细胞基因表达分析、microRNA表达分析等等。所谓“微小差异”的标准一般而言是指表达水平的差异在2倍以内。   

       8. 同等条件下，数字PCR在灵敏度方面拥有优势，使得该技术已成为**的液态活检、病原微生物检测、转基因成分测定、宿主残留DNA分析等的热门技术。

与常规PCR方法相比，数字PCR有如下优势：

1、能够***定量：常规PCR定量需要制定已知拷贝数的标准DNA曲线，但是由于待检样本与标准曲线不在统一体系，条件上会存在差异，另外加上PCR扩增效率的差异从而影响定量结果的准确性。而数字PCR不受标准曲线和扩增动力学影响，可进行***定量。

2、样本需求量低：适用于珍贵样本或核酸降解严重的样本。

3、灵敏度高：数字PCR是将传统PCR反应体系分割成数万个**PCR反应，这些反应可以精确地检测很小的目的片段差异、单拷贝甚至低浓度的混杂样本。且能避免非同源异质双链的形成。

4、高耐受性：由于目的序列被分配到多个**反应体系中，***降低了背景信号和***物对反应的干扰，扩增基质效应大大减小。 采用有限稀释的方法将目标分子分割到**的反应体系中。苏州JUE对定量数字PCR

采用微滴式技术高达100,000个的微滴。南京永诺数字PCR解决方案

       同时，从公式也可以看出，随着反应阳性体系数（X）的增加，体系中目标分子的拷贝数相对于X会有较大的差距，随着X的持续增加，数字PCR结果的不确定度也随着提高，总体来说，数字PCR阳性体系的数量不得超过总体系数量的80%。另一个方面，N的增加会使整个数字PCR体系具有较大的线性范围，并可以提高反应的灵敏度、稳定性以及可重复性。因此，目前dPCR都需要在成本可控的情况下，增加分配的腔室数和液滴数。

商业化dPCR平台及其特点

       发展到现在，市面上常见的dPCR主要有两种：微滴式dPCR（droplet dPCR，ddPCR）和芯片式dPCR（chip dPCR，cdPCR）技术。由于芯片式dPCR制造芯片的成本较高，目前微滴式dPCR正越来越受到企业的认可。 南京永诺数字PCR解决方案

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