深圳流式数字PCR解决方案

CNV（CopyNumberVariations，拷贝数变异）研究需要极高的定量精度以区别不同拷贝数之间的微小差异，测序方法适用于高于30%的变异率检测，而qPCR的比较**辨在1.5倍左右，数字PCR通过直接计数目标基因与参照基因(拷贝数为1的基因，例如RNaseP)的数目， 计算比值，直接得到目标基因的拷贝数可以达到极高的拷贝数分辨精度。除此之外，dPCR在病原微生物检测、microRNA研究、基因表达研究、NGS测序文库的***定量、表观遗传学直接相关的DNA甲基化定量检测、ChIP定量鉴定等领域的应用都令人极为期待，而在转基因成分鉴定、分子标准品精确定量、环境样本检测等具体的应用方向上，已经有大量实验数据和结果证明了dPCR技术的优良性能。开放式平台，支持用户自行开发试剂、产品。深圳流式数字PCR解决方案

数字PCR也叫DigitalPCR（dPCR），是近几年发展起来的一种核酸定量分析技术。相较于传统荧光定量PCR来说，数字PCR对结果的判定不依赖于扩增曲线循环Ct值，不受扩增效率的影响，能够直接读出DNA的分子个数，能够对起始样本核酸分子***定量。数字PCR基本原理是将一个样本分成几十到几万份，然后再将其分配到不同的反应单元中，使每个微滴单元包含一个或多个拷贝的核酸分子（即DNA模板），每个单元都会对目标分子进行扩增，然后再对每个单元进行荧光信号的统计并计算。相对而言，传统PCR或qPCR反应都是发生于同一体系当中，这也是数字PCR与其比较大的区别。 深圳流式数字PCR解决方案基因表达差异的监测。

MicroDrop-100微滴式数字PCR是具有国内自主知识产权的第三代JUE对定量PCR系统，整套系统由MicroDrop-100A微滴生成仪、MicroDrop-100B微滴检测仪以及结果数据分析设备等构成。系统通过自主设计的微流控芯片，利用油水相不兼容的原理，在2分钟时间内将PCR体系分割成100,000油包水的体系，每个体系为的PCR反应体系，体积约为0.2nL，单次实验一次可生成8个样本的油包水体系 。由于油包水体系的分割效应，使得数字PCR受PCRYi制物的影响相对较小，有利于复杂环境样本的实验操作。区别于荧光定量PCR的过程性判读方法，数字PCR结果判读为终点法，故其对PCR扩增效率的依赖也相对较小。

微滴式数字PCR系统为微流控微滴生成技术，采用原创性的油液，单个样本在微米级流道中利用气压驱动在3分钟内生成10万微滴，单次运行生成80万微滴，微滴体积达皮升级，检测线性范围达到6个数量级，各项指标均超越国内外主流产品。在液滴生成数上，MicroDrop™能达到国外同级别产品的5倍。与此同时，设备制作成本只有国外同类产品的一半。这减低了精细医疗的成本，打破了国外厂商在微滴式数字PCR领域的垄断。这意味着在未来，采用外周血、唾液、尿液、脑脊液等样本进行低成本、高灵敏、快速的无创检测成为可能。全封闭防污染设计，一键式自动化操作。

同时，从公式也可以看出，随着反应阳性体系数（X）的增加，体系中目标分子的拷贝数相对于X会有较大的差距，随着X的持续增加，数字PCR结果的不确定度也随着提高，总体来说，数字PCR阳性体系的数量不得超过总体系数量的80%。另一个方面，N的增加会使整个数字PCR体系具有较大的线性范围，并可以提高反应的灵敏度、稳定性以及可重复性。因此，目前dPCR都需要在成本可控的情况下，增加分配的腔室数和液滴数。商业化dPCR平台及其特点发展到现在，市面上常见的dPCR主要有两种：微滴式dPCR（dropletdPCR，ddPCR）和芯片式dPCR（chipdPCR，cdPCR）技术。由于芯片式dPCR制造芯片的成本较高，目前微滴式dPCR正越来越受到企业的认可。正压生成油包水的液滴。杭州广东数字PCR代理商

FAM、VIC双通道荧光检测。深圳流式数字PCR解决方案

要了解为什么传统PCR存在限制，务必要了解PCR反应过程中发生了什么。基本PCR运行可以分为三个阶段：指数期每个循环积聚的产物准确加倍（假定**反应效率）。该反应具有高度特异性和精确度。出现指数式扩增，因为所有试剂均新鲜可用，反应的动力学推动反应有利于扩增子加倍。线性期（高变异性）随着反应继续，一些试剂因扩增而被消耗。反应开始减缓，并且每个循环的PCR产物不再加倍。平台期（终点：使用传统方法进行凝胶检测）反应停止，不再产生更多产物，并且如果放置时间够长，PCR产物将开始降解。因为每个样品具有不同的反应动力学，所以每支试管或每个反应将在不同的时间点进入平台期。在平台期可以看到这些差异。在平台期内，传统PCR进行测量，又称为终点检测。深圳流式数字PCR解决方案

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