冷冻透射电镜技术服务中心

冷冻电镜技术总结：电子断层成像技术则可用来研究一定厚度的亚细胞器在天然状态下的内部结构，由于样品厚度的限制，能看到500-1000nm左右厚度的结构，的也可以了解整个细胞不同层面的内部结构.尽管，我们能够预言按目前电子冷冻断层成像技术的发展会得到许多更诱人的信息。细胞内存在大量分子机器和生物大分子复合物，并且与单个超分子相比要大，更容易对其进行识别。这样的事实使断层技术的目标变得简单了。在不久的将来关于细胞骨架，核孔复合体和核纤层，囊泡聚集和运输复合物以及其他一些细胞成分的一些基本问题会得到更清晰的阐释。这两种方法都不需要对样品进行结晶，快速含水冰冻的制样过程既不复杂，又保存了样品的瞬时天然结构，有利于对复合物的功能进行研究，图像自动化筛选过程将是今后提高分辨率的关键环节。而电子晶体学则对具有对称结构的样品进行三维重构具有很大的优势，比如二十面体病毒，螺旋对称结构等，尤其适合膜蛋白的三维结构，并且是电子显微术中目前只一能达到原子分辨率水平的方法。冷冻电镜技术的研究，主要是冷冻成像和蛋白快速冷冻技术。冷冻透射电镜技术服务中心

低温透射电镜技术的应用：胶束体系对于浓度、pH、添加剂种类等液相环境条件的变化非常敏感，如果是干燥状态其结构与有液相完全不同，因此必须用低温透射电镜表征其结构。通常情况下，胶束有球状、囊泡状、棒状、层状、六角束状、洋葱状、蠕虫状等多种形状，应用低温透射电镜技术，囊泡、胶束的结构可以被原位的真实呈现出来，可清晰地观察到囊泡的完整性、分布、大小、融合等情况，而在普通电镜条件下，干燥后的囊泡的形状、结构很容易发生变化。同样，低温透射电镜也能够有效保持聚合物在液相的形态，可清晰地观察到聚合物的形态及聚集状态。目前，低温透射电镜在生物大分子的成像尤其是蛋白结构的解析方面已经取得了诸多突破的成果，相信在化学分子材料领域也会展现很好的应用前景。温州快速冷冻显微镜技术原理冷冻电镜技术助力快速、高效的新药研发。

冷冻电镜技术基本原理之三维冷冻电镜技术：样品经过在液氮中的冷冻固定，使得生物大分子中的H2O分子以玻璃态的形式存在，保持低温，将样品放入显微镜，高度相干的电子作为光源从上面照射下来，透过样品和附近的冰层，受到散射，利用探测器和透镜系统把散射的信号成像记录下来，再进行信号处理，较后利用三维重构的技术得到样品的三维结构。冷冻电镜技术的独特优势分辨率高：光学显微镜的分辨率为0.2μm，透射电子显微镜的分辨率为0.2nm，透射电子显微镜在光学显微镜的基础上放大了1000倍。

为什么要做冷冻透射电子显微镜技术服务？a.反应样品溶液里结构：如有机分子组装成的微球、囊泡、胶束、纳米管、片层、水凝胶结构等（往往一般透射拍摄到的都是溶液挥发干了之后的结构，但是这样的结构无论是形貌和尺寸和溶液里都有一定差别，现在好多文章的审稿意见都会需要这类结构的透射照片在溶液里的真实形貌，说简单了就是让补一个冷冻透射）；b.不稳定的纳米结构：比如经不起强电子束照射的样品（MOF、COF等若相互作用力结合的材料，如金属配位、氢键相互作用、亲疏水作用力、ππ堆叠等）在强电子束照射下结构会坍塌，冷冻电镜全程在-160℃下可以做到对样品损害较小；c.生物类分子好多都需要冷冻，因为生物分子本身都需要在水或者血液等存活，一些生物样品构筑的一些纳米结构，如纳米微球、囊泡、膜、多孔材料等等。冷冻电镜技术测定结构的几种方法：X射线晶体学、NMR、和冷冻电镜技术。

冷冻电镜技术是在20世纪70年代提出的，早在20世纪70年代科学家们就利用冷冻电镜研究病毒分子的结构，头次提出了冷冻电镜技术的原理、方法以及流程的概念。冷冻电镜的发展：冷冻电镜到底是什么?从上世纪70年代兴起至今，冷冻电子显微技术(cryo-EM)已经跨越了40多年的发展历史，经历了冷冻制样、单颗粒图像分析和三维重构算法等关键性技术的突破。通俗而言，冷冻电镜就是在传统透射电子显微镜之上，加上了低温传输系统和冷冻防污染系统。冷冻电镜技术中单颗粒分析法优点：样品受总辐射值小；对称颗粒的解析分辨率更高。无锡低温冷冻透射电镜技术原理

冷冻电镜“分辨率改变”使其成为获得优于3Å结构的常规技术。冷冻透射电镜技术服务中心

冷冻电镜技术解析结构主要风险在：A.样品很不稳定，样品寄送过来的时候，已经降解或者聚集，无法进行后续处理；B.样品在冷冻制样的过程中，可能会被冻碎，从而无法进行后续处理；C.样品纯度可能很好，但是均一度很差，从而难以获得样品的高分辨结构；D.我们关心的区域可能在整个复合体中有很强的柔性，从而经过二维或者三维平均后，我们关心区域的分辨率会比较差甚至看不见，达不到我们的预期；E.一些配体，比如药物前体分子，分子量太小，不一定能在电镜的密度图中观测到；F.对于合适的样品，我们冷冻制样需要优化的参数有很多，包括样品浓度的优化，blottime的优化，温度的优化，grid规格（铜网或者金网）的优化等一系列条件的优化。因此冷冻电镜制样需要丰富的经验和充足的机时支持，不同的实验者，成功率可能差别很大。冷冻透射电镜技术服务中心

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