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湖州神经生物学膜片钳网站

来源: 发布时间:2023年02月11日

一种提高膜片钳实验效率的方法与流程:膜片钳技术是一种记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜上离子通道分子活动的技术。是用来研究单个离体的活细胞、组织切片或细胞膜片离子流的电生理实验技术。这项技术在可兴奋细胞如神经元、心肌细胞、肌纤维和胰腺细胞的研究中起至关重要的作用,也可用于研究特殊制备的巨型球状体中的细菌离子通道。传统膜片钳技术对实验人员的技术要求非常高,一般地,实验人员需要经过严格的长期的训练,才能准确且快速的操作。膜片钳技术是用来研究单个离体的活细胞、组织切片或细胞膜片离子流的电生理实验技术。湖州神经生物学膜片钳网站

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膜片钳技术是用于纪录全细胞或个别细胞膜上离子信道电生理特性的研究方法,目的在于提供基础研究知识与新药开发时研究细胞电特性或小分子药物对细胞膜上离子信道特性的影响,替开发标靶药物提供一个测试平台。传统的细胞培养膜片钳系统由人工操作,实验人员在取得元代细胞(例如心肌细胞与神经元)后,将研究对象细胞养在玻片上,以手动方式将纪录电极移动放置在胞体上方并压到细胞膜上,此时纪录电极在膜外溶液里的电阻大约为3-9 ΜΩ。湖州神经生物学膜片钳网站膜片钳的应用:在心血管药理研究中的应用。

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全自动膜片钳的优势:自动化:抓取细胞、形成封接、破膜等整个实验操作全部自动化,极大的节约实验人员的时间精力。简约化:传统膜片钳所需要的显微镜、显微操作系统、微电极拉制仪,防震台、屏蔽网等全都不需要。效率高:是传统膜片钳实验效率的5-10倍。可靠性:实验结果轻松复制。经济实惠:药物消耗低,每次实验记录较低只需5μl内外液体。零技术门槛:无需膜片钳操作经验,轻松上手。高芯片封接:封接电阻可达1GΩ。确保实验可靠性。兼容性强:可与市场上大多数放大器兼容。应用范围广:除拥有传统膜片钳功能外,还可以对手动膜片钳无法涉及的亚细胞结构进行记录。扩展功能多:配套扩展设备丰富,如內灌流系统、温度控制系统、脂质体制备器等。

膜片钳操作实验:膜片钳实验难度大、技术要求高,要掌握有关技术和方法虽不是很困难的事,但要从一大批的实验数据中,经过处理和分析,得出有意义、有价值的结果和结论,就显得不那么容易,有许多需要注意和考虑的问题,包括减少噪音,避免电极前端的污染,提高封接成功率,具体实验过程中还需要考虑如何选取记录模式,为记录特定离子电流如何选择电极内、外液,如何选择阻断剂、激动剂,如何进行正确的数据采集等许多更为复杂的问题,还需在科研实践中不断地探索和解决。膜片钳技术的应用范围:膜片钳技术在通道中的研究。

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膜片钳技术与其他生物检测技术的结合应用:1.膜片钳与光学显微成像技术结合应用:利用激光扫描共聚焦显微镜、双光子显微镜、荧光显微镜等技术可以对细胞进行实时成像研究,将膜片钳技术与光学显微成像技术结合使用不但可以检测细胞的电流变化情况,而且还可以对细胞的电信号传递活动进行成像观察。2.膜片钳与原子力显微镜结合应用:将膜片钳和AFM结合使用的技术可以提高细胞电生理检测的分辨率和灵敏度;而且,在获得细胞电生理信息的同时,还能获取细胞的生物力学性质,从而更很全地研究细胞的生理功能。膜片钳的数据如何处理:通过渗透很快改变胞浆成分并达到平衡。湖州神经生物学膜片钳网站

膜片钳使用操作注意:禁止私拉电线,如有实验要求可与老师及时沟通。湖州神经生物学膜片钳网站

膜片钳实验中电极制备之在电极前端涂以硅酮树脂(sylgard),其目的是为了降低电极与灌流液之间的电容,并形成一个亲水界面。经此处理后,上述电容可由6~8pF减少到1pF以下。硅酮树脂对形成Giga?鄄seals无影响,但可减少本底噪音,对单通道记录很重要。在进行全细胞记录时,不用硅酮树脂也可以得到满意的效果,通常微电极在涂抹硅酮树脂后再进行抛光,但较好是在涂抹后一小时内抛光,否则很难改变电极尖锐端的形状。全自动膜片钳在药物筛选中的应用:全自动膜片钳技术一个重要的应用方向是检测早期药物化合物对hERG的毒副作用。hERG通道产生的电流是心室复极中较重要的电流。通道被药物后抑制直接导致LongQT综合症,很可能演变成尖锐端扭转型室性心动过速,心室纤颤,直至猝死。目前发现几乎所有的临床药物所至的LQT或者TdP都作用于hERG,且导致hERG抑制的药物在化学结构上没有明显的共性,从而很难预测,只有通过实验的方式给予解决。湖州神经生物学膜片钳网站

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