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来源: 发布时间:2023年01月14日

膜片钳技术及其应用:它是作者在\"膜片钳技术及其应用\"领域所进行的研究工作的总结,同时也吸取了国际上的先进技术和新近的研究成果。内容包括:细胞电生理与膜片钳技术,膜片钳系统的组建及实验技术概要,膜片钳放大器原理与低噪声设计,单通道和全细胞电流记录技术,数据采集和分析,细胞分泌活动的膜电容监测技术和安培测量技术,细胞内钙离子浓度的测量及钙库特性,脑切片膜片钳技术,心肌细胞的药理特性和植物细胞的离子通道特性。膜片钳技术的应用范围:在神经科学中的研究。宁波医学膜片钳电生理技术网站

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膜片钳技术是用于纪录全细胞或个别细胞膜上离子信道电生理特性的研究方法,目的在于提供基础研究知识与新药开发时研究细胞电特性或小分子药物对细胞膜上离子信道特性的影响,替开发标靶药物提供一个测试平台。传统的细胞培养膜片钳系统由人工操作,实验人员在取得元代细胞(例如心肌细胞与神经元)后,将研究对象细胞养在玻片上,以手动方式将纪录电极移动放置在胞体上方并压到细胞膜上,此时纪录电极在膜外溶液里的电阻大约为3-9 ΜΩ。绍兴全自动实用膜片钳方案膜片钳使用操作注意:用仪器的同学必须履行实验室相关要求,完成值日等相关工作。

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膜片钳的技术原理:膜片钳技术是用玻璃微电极吸管把只含1-3个离子通道、面积为几个平方微米的细胞膜通过负压吸引封接起来,由于电极尖锐端与细胞膜的高阻封接,在电极尖锐端笼罩下的那片膜事实上与膜的其他部分从电学上隔离,因此,此片膜内开放所产生的电流流进玻璃吸管,用一个极为敏感的电流监视器(膜片钳放大器)测量此电流强度,就表示单一离子通道电流。膜片钳技术的建立,对生物学科学特别是神经科学是一具有重大意义的变革。这是一种以记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜单一的(或多个)的离子通道分子活动的技术。此技术的出现自然将细胞水平和分子水平的生理学研究联系在一起,同时又将神经科学的不同分野必然地融汇在一起,改变了既往各个分野互不联系、互不渗透,阻碍人们全部认识能力的弊端。

膜片钳技术是一种记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜上离子通道分子活动的技术。是用来研究单个离体的活细胞、组织切片或细胞膜片离子流的电生理实验技术。这项技术在可兴奋细胞如神经元、心肌细胞、肌纤维和胰腺细胞的研究中起至关重要的作用,也可用于研究特殊制备的巨型球状体中的细菌离子通道。传统膜片钳技术对实验人员的技术要求非常高,一般地,实验人员需要经过严格的长期的训练,才能准确且快速的操作。膜片钳技术是用于纪录全细胞或个别细胞膜上离子信道电生理特性的研究方法膜片钳技术本质上也属于电压钳范畴。

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膜片钳的应用:在心血管药理研究中的应用:随着膜片钳技术在心血管方面的普遍应用,对血管疾病和药物作用的认识不只得到了不断更新,而且在其病因学与药理学方面还形成了许多新的观点。正如诺贝尔基金会在颁奖时所说:“Neher和Sadmann的贡献有利于了解不同疾病机理,为研制新的更为有效的药物开辟了道路”。创新药物研究与高通量筛选:在离子通道高通量筛选中主要是进行样品量大、筛选速度占优势、信息量要求不太高的初级筛选。较近几年,分别形成了以膜片钳和荧光探针为基础的两大主流技术市场。将电生理研究信息量大、灵敏度高等特点与自动化、微量化技术相结合,产生了自动化膜片钳等一些新技术。膜片钳使用的注意事项:在放大器打开时不能用手、金属物品或其它导电的物品接触电极丝。南京药理学膜片钳技术原理

膜片钳技术的应用范围:对离子通道生理与病理作用机制的研究。宁波医学膜片钳电生理技术网站

膜片钳的数据如何处理:通过渗透很快改变胞浆成分并达到平衡,该手段在全细胞记录中普遍应用。膜片钳操作实验:膜片钳实验难度大、技术要求高,要掌握有关技术和方法虽不是很困难的事,但要从一大批的实验数据中,经过处理和分析,得出有意义、有价值的结果和结论,就显得不那么容易,有许多需要注意和考虑的问题,包括减少噪音,避免电极前端的污染,提高封接成功率,具体实验过程中还需要考虑如何选取记录模式,为记录特定离子电流如何选择电极内、外液,如何选择阻断剂、激动剂,如何进行正确的数据采集等许多更为复杂的问题,还需在科研实践中不断地探索和解决。宁波医学膜片钳电生理技术网站

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