嘉兴全自动实用膜片钳原理及步骤

膜片钳法的各种模式：膜外面向内模式：从全细胞模式将膜片微电极向上提起可得到切割分离的膜片，由于它的细胞膜内侧面面对膜片微电极腔内液，膜外面自然封闭而对外，所以这个模式被称为莫外面向内模式。开放细胞吸附膜内面向外模式：将细胞吸附模式的膜片以外的某部位的胞膜进行机械地破坏，经破坏孔调控细胞内液并在细胞吸附状态下进行内面向外的单一离子通道记录。穿孔囊泡膜外面向外模式：从穿孔膜片模式将膜片微电极向上提起，便在微电极尖锐端处形成一个膜囊泡，如果条件较好，此膜囊泡内不只有细胞质因子还可有线粒体等细胞器存在。膜片钳技术的应用范围：对药物作用机制的研究。嘉兴全自动实用膜片钳原理及步骤

膜片钳在通道研究中的重要作用：应用膜片钳技术可以直接观察和分辨单离子通道电流及其开闭时程、区分离子通道的离子选择性、同时可发现新的离子通道及亚型，并能在记录单细胞电流和全细胞电流的基础上进一步计算出细胞膜上的通道数和开放概率，还可以用以研究某些胞内或胞外物质对离子通道开闭及通道电流的影响等。同时用于研究细胞信号的跨膜转导和细胞分泌机制。结合分子克隆和定点突变技术，膜片钳技术可用于离子通道分子结构与生物学功能关系的研究。连云港细胞生物学膜片钳实验设计公司膜片钳和电压钳的区别：电压钳技术只能用来研究整个细胞膜或一大块细胞膜上所有离子通道活动。

膜片钳在通道研究中的重要作用：对离子通道生理与病理情况下作用机制的研究：通过对各种生理或病理情况下细胞膜某种离子通道特性的研究，了解该离子的生理意义及其在疾病过程中的作用机制。如对钙离子在脑缺血神经细胞损害中作用机制的研究表明，缺血性脑损害过程中，Ca2+ 介导现象起非常重要的作用，缺血缺氧使Ca2+通道开放，过多的Ca2+进入细胞内就出现Ca2+超载，导致神经元及细胞膜损害，膜转运功能障碍，严重的可使神经元坏死。

膜片钳技术是通过微玻管电极（膜片电极或膜片吸管）接触细胞膜，用千兆欧姆以上的阻抗使之封接，在电学上分隔和电极尖开口处相接的细胞膜的小区域（膜片）以及其周围，在此基础上固定点位，对这膜片上的离子通道的离子电流（pA级）进行监测记录的方法。测量回路的中心部分是使用场效应管运算放大器构成的I-V转换器。当场效应管运算放大器的正负输入端子是等电位，向正输入端子施加指令电位时，因为短路负端子以及膜片都可等电位地达到钳制的作用，字膜片微电极与默片之间形成10GΩ以上封接时，其间达到很小的分流电流。膜片钳技术本质上也属于电压钳范畴。

膜片钳使用的注意事项：1.为了防止尘埃、静电伤害机器，每天做实验前请用清水拖地。2.拉制仪使用前需预热15-30min。3.银丝电极及地线发白时，请先用砂纸轻微打磨，再浸入新鲜的次氯酸钠溶液镀氯化银，如果银丝电极30min未变黑，则考虑更换次氯酸钠。4.先开放大器，后开软件；先关软件，后关放大器。5.非必须用到汞灯时请不要打开汞灯电源，打开后至少需1个小时才可关闭。6.在放大器打开时不能用手、金属物品或其它导电的物品接触电极丝（包括地线），在取放细胞片时请关闭放大器。膜片钳技术用特制的玻璃微吸管吸附于细胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面积为微米数量级，因此封接范围内细胞膜光有少数离子通道。为了测量在不同药物对细胞中的离子通道的影响，通常需要在膜片钳实验中实施灌流。金华细胞生物学膜片钳电生理技术原理及步骤

膜片钳技术的应用范围：创新药物研究与高通量筛选的研究。嘉兴全自动实用膜片钳原理及步骤

在进行细胞吸附式膜片钳记录时，一般来说，我们通过电压钳（voltageclamp,VC）模式将细胞膜电位维持在-60mV（大多数脊椎动物神经元的静息膜电位），从而保证通过电极尖锐端的电流即为跨膜离子流。一般来说，细胞吸附式膜片钳可以作为对照来验证其他单通道记录构型下通道活动的改变情况，也可以用来检测化学物质引起的通道的和活动/对通道活动的影响是否经过胞内信使的介导。这里有一点需要注意，每个待研究细胞的Em都会有轻微的差异，因此我们在分析cell-attached的数据的时候，需要拿出事先记录好的Em，一般有三种方法:用胞内记录或全细胞记录的方法，获得一个平均Em；在实验结束时，patch破裂，在电流为0的情况下记录到的电势就为Em;结合离子通道的其他数据来反向推算Em。嘉兴全自动实用膜片钳原理及步骤

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