血清的安全风险因素主要有以下方面:地理因素,地理因素包括血清产地的流行病学趋势、基础设施情况以及血源供应量。措施得当可以预防能避免的动物疾病,同时产地国稳定可靠的基础设施,对保证供应链的安全也十分必要。血源是否充足则决定了血清是否可源源不断地持续供应。生产,生产遵循cGMP指南,则可保证血清质量,降低有关无菌过滤、掺加和标签错误的风险。cGMP为现场审核的开展提供了框架。生产过程中对血清进行有效的无菌过滤也是十分重要的。产品质控,有效的无菌过滤使得细菌污染的风险很低。对于支原体和病毒筛查,一些相关规范内部存在一定的方法灵活性,这使得采取不同方法进行支原体和病毒筛查成为可能,并且有时使得要筛查的病毒种类无需太多。有效辐照,要进一步降低外源因子风险,可对血清进行辐照(25–40 kGy)。但辐照并不能保证病毒污染的完全去除。辐照过量会导致FBS效能下降。胎牛血清提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。东莞细胞培养用胎牛血清供应商
那么如何保障胎牛血清的品质呢:内有毒的,内有毒的含量越低的血清,胎牛血清级别就越高:内有毒的≤10EU/ml时,此血清为特级胎牛血清;10EU/ml<内有毒的≤ 25EU/ml时,此血清为优级胎牛血清;内有毒的≥ 25EU/ml时,此血清为标准级胎牛血清;应选取内有毒的含量低的胎牛血清,使培养的细胞更健康。如果选取内有毒的较高的血清,细胞一直泡在“毒液”里,短期内细胞看不出太明显的变化,但长期的话细胞会衰老得较快,从而对实验结果造成严重影响。微生物:微生物包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原毒等。严格的生产工艺可以对细菌、霉菌等“大型”微生物几乎能100%控制。同时3次0.1um过滤可以完全祛除支原体(支原体直径0.2~0.3um)。通过病毒的检测,可以严格控制牛腹泻、牛细小、蓝舌病等病毒。通过非疯牛病疫区生产还可避免朊病毒。东莞细胞培养用胎牛血清供应商血清的主要作用是提供基本营养物质、提供和各种生长因子、提供结合蛋白。
多数细胞培养中血清的热灭活并不是必要的。很多场合下,热灭活并不会改善细胞的生长,却降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下,其促进的比率也是微不足道的。另外,血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物的污染,从而给用户和供应商都带来不必要的麻烦。所以胎牛血清不推荐热灭活。热灭活一般是指在做免疫相关的试验中,通过加热灭活掉血清中的补体,以避免对免疫试验的影响。在胎牛血清中,由于胎龄原因,尚未形成完整的补体系统,因此,胎牛血清不会真正干预免疫试验。故不需灭活。并且,热灭活反而可能导致胎牛血清中部分重要的生长因子的活性衰减,进而影响细胞培养效果。
很好的胎牛血清:好的血清应是透明清亮,土黄色或棕黄色,无沉淀或极少沉淀,比较粘稠。如发现血清浑浊,不透明,含许多沉淀物,说明血清污染或血清中的蛋白质变性;若棕红色,说明血清中的血红蛋白含量太高,有溶血现象。胎牛血清一般范围是30-40mg/ml,数值偏高,说明的牛龄偏大,不是胎牛;数值偏低,表明血清可能掺水了。标准为不高于20mg/dl,颜色越红,数值越高;反之,数值越低。国产血清,大多高于ph7.5,进口胎牛血清,大多低于ph7.5,具体原因未知,可能和牛龄有关,这也能用来初步鉴别血清的来源。血清在溶解过程中必须规则地摇晃均匀。
加工是对采集到的很好胎牛血清进行解冻,在这个过程中温度及环境指标的控制至关重要,解冻的过程是整个流程中较为容易产生细菌累积的步骤,精确控温的分步解冻可以极大的减少这个步骤的细菌累积。解冻后的血清会被送到制剂室进行分离,分离后的血清需经过多次过滤以去除生物污染。较为终的成品血清会被分装包装后进行后续的运输及销售。整个生产的过程中还会有一系列的质量相关的成分检测。国内的生物产业正在迎来一轮新的发展高峰,生命科学研究发展快速,科研项目数量也逐年递增,前沿课题的研究都需要培养大量的细胞。就目前的实验环境来看,含有FBS的细胞培养基仍然是目前主流的细胞培养体系。每100ml人血清含有蛋白质6-8g,其中主要是白蛋白和球蛋白。东莞细胞培养用胎牛血清供应商
热灭活:一般是以56℃,30分钟来处理已解冻的血清,因为此加热步骤,可以使补体去活化。东莞细胞培养用胎牛血清供应商
血清的保存应该注意:需要长期保存的血清必须储存于-20℃-70℃低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月,由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃至-70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室温,待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。东莞细胞培养用胎牛血清供应商