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    一种是用beta巯基乙醇打开蛋白质分子二硫键的，另一种是用DTT(二硫苏糖醇)。两者的作用是一样的，但特点不一样，前者更容易与氧气反应，稳定性比后者差，如果在常温下暴露在空中，前者只能维持24小时的活性，后者却可以维持7天左右。所以该如何选择?如果是蛋白样品较少，跑几次就可以用完的样品，这时选择beta巯基乙醇。如果样品很多，计划跑上几十次的，优先选择DTT,建议变性后分装保存。二、SDS-PAGE凝胶配制1、配胶前准备首先强调一下，一块好的胶是跑好蛋白的前提，所以这个环节也不容忽视。玻璃板的选择，一种是1毫米厚度的，另一种是，这个厚度选择也是有讲究的，如果上样体积小于10微升，优先选1毫米，否则选。原因是什么?答案在转膜部分揭晓。还有分离胶的浓度也要选择适合的。然后玻璃板和梳子要洗干净，晾干。装板，注意厚板和薄板的底部要对齐，否则会漏胶。加制胶的各成分前，要观察液体是否有沉淀，有沉淀的尽量不要用。2、制胶按配方说明依次加入各组分，加完SDS后先简单手动摇匀几下，然后迅速加入过硫酸铵和TEMED,摇匀，紧接着就灌胶。然后我习惯用95%的酒精压胶，我也用过纯水，感觉纯水压没那么好，由于水的密度较大，会把分界处的胶压得膨大。细胞生物学是生物学的一个分支，研究细胞的结构、功能、生理和遗传学等方面。河北裸鼠科研技术服务服务

    应退回纯酒精中重新脱水，然后再透明，否则切片难以镜检。（4）二甲苯应尽量保持无水，应经常更换，或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。5.透蜡注意事项（1）透蜡的目的是除去组织中的透明剂（如二甲苯等），使石蜡渗透到组织内部达到饱和程度以便包埋。透蜡时间根据组织大小而定。（2）尽量保持在较低温度中进行，以石蜡不凝固为度。（3）透蜡温度要恒定，不可忽高忽低。（4）操作要迅速，力求在短的时间内完成石蜡透入过程，以免引起组织变硬、变脆、收缩等。（5）注意温度不要过高，以免组织发脆。6.染色水洗注意事项（1）染色原理：伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合，如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。（2）染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低，适当缩短或延长。室温高时促进染色，染色时间可短些，否则可适当延长时间，冬季室温低时可放入恒温箱中染色。（3）注意流水不能过大，以防切片脱落。（4）如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。兔科研技术服务细胞核是细胞的控制中心，它包含了遗传物质DNA，控制着细胞的生长和分裂。

    实验样本分类实验一般采取样本有：血液样本、样本和细胞样本。通常，样本采集后，应立即用等渗溶液（PBS或生理盐水）尽量把血液漂洗干净（除非血液也是分析对象），用滤纸或纱布吸干，把样本分切成几分，每份的体积约2个黄豆大小，每份用一个管子装。血液样本的采集应根据不同实验的要求，将会采取不同策略。血清样本：全血中不加抗凝剂，血液凝固后取出的不含凝血因子的淡黄色透明液体。（全血标本室温放置2小时3000rpm/min离心15min）血浆样本：全血中加抗凝剂，血液凝固后取出的含凝血因子的淡黄色透明液体。（可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8℃，3000rpm/min离心15min）如果是做生化\ELISA等检测可以考虑血浆和血清，根据获得的样本量可考虑分装成100-500μl/管，可避免反复冻融造成的检测误差。生化：建议优先选择血清，其次选择肝素抗凝血浆；ELISA：建议优先选择血清，其次选择肝素或EDTA抗凝血浆；凝血实验：只能选择枸橼酸钠抗凝血浆；血常规：只能选择EDTA抗凝全血；如果要收集其中的白细胞、血小板等建议用抗凝全血。如果要做流式建议用专门的流式用血液收集管，防止表面抗原的丢失，或者尽快安排就近检测。样本处理取样完后。

    脓毒症动物模型必须具备以下基本要素：有脓毒症典型的高排低阻血流动力学表现和高代谢状态；伴发多个功能障碍；有较高的自然死亡率，根据脓毒症的转归，要求动物模型的自然死亡率达到50%～70%；脓毒症是严重引起机体的炎症反应过度造成的自身损伤，不是细菌和内对机体的直接损伤，故出现功能障碍及动物死亡距脓毒症模型制备应有一定的时间间距。一般在制模后6～12h后发生的功能障碍或死亡属全身炎症反应所致。实验动物的选择在制作动物模型时多选用雄性小鼠，因为雌性小鼠较雄性小鼠更能耐受脓毒症和失血性休克，且进入发期的雌性小鼠性水平变化很大，而雄性小鼠在脓毒症时更易于发生免疫抑制。为什么选择CLP模型？盲肠结扎穿孔模型（CLP）模型是接近于人类脓毒症机制的模型，被称为脓毒症模型的“金标准”。CLP技术在20世纪70年代被建立。CLP模型非常适宜用于防治脓毒症或脓毒性休克新药的临床前观察造模方法CLP脓毒症模型的建立主要分为两个阶段：盲肠远端结扎和盲肠穿刺。首先是手术引发的结扎部位组织变性坏死引起局部炎症反应，其次是穿孔后使粪便内容物漏入腹膜引起多菌性细菌性腹膜炎，进而诱发全身性炎症反应。动物疾病模型是一种用于研究人类疾病的重要工具。

    建议按照2×106每孔的数量将293T细胞均匀铺入。(2)第二天：在24小时之内，观察293T细胞的汇合度在90%~95%之间时，向其中加入DNA-脂质体复合体，DNA-脂质体复合体制备方法如下：a)轻轻混匀LipoMax，根据说明书加入相应量于500µlOpti-MEM无血清培养基中，混合均匀并置于室温5分钟。b)在500µlOpti-MEM无血清培养基中稀释DNA，总质量为15µg按照载体质粒:psPAX2:=4:3:1的比例加入DNA。c)将稀释后的LipoMax和稀释后的DNA轻轻混匀，常温静置20分钟，形成DNA-LipoMax复合体。(3)将DNA-LipoMax复合体轻柔地滴加至细胞培养皿中，轻轻摇晃培养皿混匀，放入细胞培养箱中培养。(4)病毒收集浓缩病毒：加入DNA-LipoMax复合体48小时后，收集病毒上清，同时加入10ml预温的293T培养基到细胞培养皿中。将收集到的病毒上清存在4℃冰箱中;收集72小时病毒上清，与48小时病毒上清混在一起。将离心机温度降温到4℃，600g，离心5分钟，去除其中的细胞碎片，上清液经µm滤头过滤，加入病毒浓缩液，配制浓缩病毒液。将浓缩后的病毒放于4℃冰箱摇床上，旋转过夜。第二天，4度离心机，3000~4000g离心15分钟。弃掉上清液，加入1Xpbs或培养基重悬。随着跨学科研究的深入开展，动物疾病模型将在未来发挥更为普遍的作用，成为生命科学、医学等领域研究工具。宁夏动物科研技术服务实验室

这项技术可用来将含有上千种不同蛋白质的样品中，分离和浓缩出特定蛋白质。河北裸鼠科研技术服务服务

    静置25分钟后把酒精倒干，用吸水纸吸出多余的酒精，然后配压缩胶，同样的操作，关键是梳子要插得快，要小心梳子下产生气泡，然后静置30分钟。如果是当天跑胶，我会等上层胶凝2个小时再用，但要注意防干燥缩水，可以在一个小时的时候沿着梳子上缘加点电泳液。所以我一般提前一晚制胶，泡于纯水或者电泳液里置于4度冰箱暂存。三、蛋白电泳1、上样前准备把胶组装到电泳芯上，注意密闭性(否则漏液)，如果内槽漏液就不是匀强电场了，条带可能就不是一条直线。然后内槽倒满电泳液，拔梳子，这一步要小心，梳子要两边一起缓缓往上拔出，然后观察泳道内有无脱落的胶粒或者胶丝，有的话用1毫升注射器吸出。然后从冰箱取出蛋白样品，解冻。准备振荡器。2、上样和电泳注意，上样后蛋白会开始慢慢在胶中弥散，所以上样越快越好。我习惯先上蛋白Marker,再上蛋白样品，蛋白上样前确保样品完全解冻和充分振荡(推荐使用振荡器振荡)，吸的时候没有拉丝即可，建议上样分钟把样品从冰上取出来，不然样品中SDS可能会结晶析出，从而影响电泳效果。上层胶80V25分钟，下层胶120V65分钟。四、转膜1、转膜前准备我会在电泳结束0分钟准备，把转膜液配好置于4度冰箱预冷，然后裁膜，准备转膜装置。河北裸鼠科研技术服务服务