根据阿贝成像原理,许多光学成像系统是一个低通滤波器,物平面包含从低频到高频的信息,透镜口径会限制高频信息通过,只允许一定的低频通过,因此丢失了高频信息会使成像所得图像的细节变模糊,降低分辨率。对于三维成像来说,宽场照明时得到的信息不仅包含物镜焦平面上样品的部分信息,同时还包含焦平面外的样品信息。由于受到焦平面外的信息干扰,常规荧光显微镜无法获得层析图像。三维结构光照明显微镜能够提高分辨率、获得层析图像,是因为利用特定结构的照明光能引入样品的高频信息,当结构光的空间频率足够高时,只有靠近焦面的部分才能被结构光调制,超出这一区域,逐渐转变为均匀照明,也就是只有焦面附近的有限区域具有相对完整的频谱信息,离焦后,高频信息迅速衰减,所以使用高频结构光照明可以区分焦面和离焦区域来获得层析图像。然后再通过轴向扫描可以获取样品不同深度的焦面图像,重建样品的三维结构。多光子显微镜在基础科学和临床诊断领域的应用范围正在持续增长。清醒动物多光子显微镜Ultima Investigator

多光子显微镜成像深度深、对比度高,在生物成像中具有重要意义,但通常需要较高的功率。结合时间传播的超短脉冲可以实现超快的扫描速度和较深的成像深度,但近红外波段的光本身会导致分辨率较低。基于多光子上转换材料和时间编码结构光显微镜的高速超分辨成像系统(MUTE-SIM)是由清华大学教授和北京大学彭研究员合作开发的。可实现50MHz的超高扫描速度,突破衍射极限,实现超分辨率成像。与普通荧光显微镜相比,该显微镜经过改进,只需要较低的激发功率。这种超快、低功耗、多光子超分辨率技术在高分辨率生物深层组织成像中具有长远的应用前景。清醒动物多光子显微镜Ultima Investigator证实了多光子显微镜对皮肤和别的皮肤病的诊断的可行性。

现代分子生物学技术的迅速发展和科技的进步,特别是随着后基因组时代的到来,人们已经能够根据需要建立各种细胞模型,为在体研究基因表达规律、分子间的相互作用、细胞的增殖、细胞信号转导、诱导分化、细胞凋亡以及新的血管生成等提供了良好的生物学条件。然而,尽管人们利用现有的分子生物学方法,已经对基因表达和蛋白质之间的相互作用进行了深入、细致的研究,但仍然不能实现对蛋白质和基因活动的实时、动态监测。在细胞的生理过程中,基因、尤其是蛋白质的表达、修饰和相万作用往往发生可逆的、动态的变化。目前的分子生物学方法还不能捕获到蛋白质和基因的这些变化,但获取这些信息对与研究基因的表达和蛋白质之间的相互作用又至关重要。因此,发展能用于、动态、实时、连续监测蛋白质和基因活动的方法非常必要。
多光子显微镜对成像深度的改善利用红光或红外光激发,光散射小(小粒子的散射与波长的四次方的成反比)。不需要***,能更多收集来自成像截面的散射光子。***不能区分由离焦区域或焦点区发射出的散射光子,多光子在深层成像信噪比好。单光子激发所用的紫外或可见光在光束到达焦平面之前易被样品吸收而衰减,不易对深层激发。多光子荧光成像的特点。深度成像∶与共聚焦相比能更好地对厚散射物质成像。信噪比∶多光子吸收采用的波长是单光子吸收的2倍以上,所以显微试样中的瑞利散射更小,荧光测定的信噪比更高。观察活细胞∶离子测量(i.e.Ca2+),GFP,发育生物学等—减少了光毒性和光漂白,能对细胞长时间观察。多光子显微镜已经被生物学家普遍的运用于实验中。

Ca2+是重要的第二信使,对于调节细胞的生理反应具有重要的作用,开发和利用双光子荧光显微成像技术对Ca2+荧光信号进行观测,可以从某些方面对有机体或细胞的变化机制进行分析,具有重要的意义。利用双光子荧光显微成像技术可以观察细胞内用荧光探针标记的Ca2*的时间和空间的荧光图像的变化,还可以观察细胞某一层面或局部的(Ca2+)荧光图像和变化。通过对单细胞的研究发现,Ca2+不仅在细胞局部区域间的分布是不均匀的,而且细胞内各局部区域的不同深度或层次间也存在不同程度的Ca2+梯差即所谓的空间Ca2梯差。中国市场多光子显微镜进出口贸易趋势。清醒动物多光子显微镜Ultima Investigator
多光子激光扫描显微镜更能解决生物组织中深层物质的层析成像问题, 扩大了应用范围。清醒动物多光子显微镜Ultima Investigator
随着现代分子生物学技术的快速发展和科学技术的进步,特别是后基因组时代的到来,人们已经能够根据需要建立各种细胞模型,这为在体内研究基因表达、分子间相互作用、细胞增殖、细胞信号转导、诱导分化、细胞凋亡和新生血管生成提供了良好的生物学条件。然而,尽管利用现有的分子生物学方法对基因表达与蛋白质的相互作用进行了深入细致的研究,但仍然无法实现对蛋白质和基因活性的实时动态监测。在细胞的生理过程中,基因尤其是蛋白质的表达、修饰和相互作用往往是可逆的、动态变化的。目前,分子生物学方法无法捕捉到蛋白质和基因的这些变化,但获得这些信息对于研究基因表达与蛋白质的相互作用非常重要。因此,有必要发展一种动态、实时、连续监测蛋白质和基因活性的方法。清醒动物多光子显微镜Ultima Investigator
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